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研究目的系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus, SLE)是一种异质性自身免疫疾病,常累及机体多个组织器官,发病原因至今不明。SLE的病理特点是多种自身抗体过量表达和大量抗原-抗体免疫复合物沉积。DNA是SLE最重要的自身抗原之一,抗双链DNA (ds-DNA)抗体作为SLE标志性抗体,对诊断和治疗效果的观察具有重要意义。SLE抗双链DNA抗体与DNA的主要结合部位为保守的磷酸骨架,也有部分抗体特异性结合于DNA碱基区域,具有种类差异性。多胺(polyamines)作为一类小分子生物胺类化合物,广泛存在于真核生物细胞核及原核生物细胞内,在DNA构象及基因转录等方面发挥重要作用。本研究通过检测多胺对SLE患者及健康正常人群(Normal Human Subjects, NHS)血清抗双链DNA抗体与小牛胸腺DNA及藤黄微球菌DNA结合力的影响,对DNA与抗DNA抗体的结合作用机制做了初步探讨,揭示了不同抗DNA抗体之间的差异性,以及多胺对SLE抗DNA抗体的可能作用。研究方法取SLE患者血清5例,其中女性3例,男性2例,其诊断符合1997年美国风湿病学会(ACR)修订的SLE分类标准。健康对照组NHS血清5例,其中女性3例,男性2例。采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immune Sorbent Assay, ELISA),分别以小牛胸腺(Calf Thymus, CT) DNA和藤黄微球菌(Micrococcus Luteus, MC) DNA作为哺乳动物抗原和细菌抗原的代表,测定三种多胺(精胺、亚精胺和腐胺)在不同浓度下(50-1000μM)对SLE及NHS抗CT DNA抗体及抗MC DNA抗体浓度的影响。以多胺存在条件下与无多胺存在条件下抗体浓度的比值判定多胺对抗体与抗原结合力的作用水平。为进一步测定精胺对不同类型抗DNA抗体的作用,SLE或者NHS血清先经CT-DNA纤维素膜(CT-DNA cellulose)吸附除去非特异性抗DNA抗体,再测定精胺存在条件下抗体浓度变化。以破伤风类毒素为抗原,用相同方法测定精胺对SLE血清抗破伤风类毒素抗体浓度的影响,以检验多胺对抗DNA抗体作用的特异性。用单样本方差分析及配对T检验进行数据统计分析,P<0.05被认为差异有统计学意义。结果1.50-1000μM精胺及100-1000μM亚精胺可显著减低5例SLE血清抗CT DNA抗体与CT DNA结合力(P<0.01)；腐胺对SLE抗CT DNA抗体结合力无影响(P>0.05)。同等浓度下,精胺对抗CT DNA抗体的作用水平强于亚精胺和腐胺(P<0.01)。2.精胺不但直接抑制SLE血清抗CT DNA抗体结合于抗原,还可以解离已经形成的DNA抗原抗体复合物(P<0.01)。3.精胺对5例NHS血清抗MC DNA抗体与MC DNA结合无影响(P>0.05)。4.精胺显著抑制2例SLE血清S1、S2抗MC DNA抗体与MC DNA结合(P<0.01)；对于另外3例SLE血清S3、S4和S5抗MC DNA抗体与MC DNA结合无影响(P>0.05)。5.经CT-DNA纤维素膜吸附之后,5例SLE血清抗MC DNA抗体浓度下降(P<0.05)。其中S1、S2抗MC DNA抗体浓度降低程度明显大于S3、S4和S5(P<0.01)。5例NHS血清经CT-DNA纤维素膜吸附之后,其抗MC DNA抗体浓度无改变(P>0.05)。6.经CT-DNA纤维素膜吸附之后,精胺仍可以降低SLE血清S1、S2抗MC DNA抗体与MC DNA结合力(P<0.05),但作用程度小于相同条件下经普通对照纤维素膜吸附组(P<0.01)7.精胺对5例SLE血清抗破伤风类毒素抗体与破伤风类毒素结合无影响(P>0.05)。结论SLE抗DNA抗体与DNA结合可分为非特异结合和特异性结合两种方式,SLE患者个体所含两种抗体的相对含量不同。精胺可显著抑制非特异性结合的抗DNA抗体与DNA结合,并可成为检验抗DNA抗体与DNA作用方式的工具。其可能机制是多胺以静电作用结合于DNA磷酸骨架,改变DNA抗原性及降低抗DNA抗体与DNA之间的电荷吸引力。对于特异性结合于DNA非磷酸骨架部位的抗DNA抗体和非DNA抗体,精胺无作用。精胺作为一种生物性小分子胺类化合物,有望在SLE诊疗中发挥更大作用。研究目的多胺是包括精胺、亚精胺和腐胺在内的小分子脂肪族化合物,广泛分布于生物体的组织和细胞,是核酸、蛋白质等生物大分子重要的调控物质,在细胞代谢及增殖分化中发挥重要作用。多胺的合成及分解代谢在体内保持相对平衡,并受到精密调节。鸟氨酸脱羧酶(ODC)、S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(SAMDC)是多胺合成的两个关键酶,精胺／亚精胺N1-乙酰转移酶(SSAT)是多胺分解的关键酶。应用高效液相色谱(HPLC)技术,能够准确分离并测量生物样本内游离态精胺、亚精胺和腐胺的浓度。本论文第一部分,我们发现精胺、亚精胺可以在体外环境下抑制部分SLE抗ds-DNA抗体与DNA抗原结合。本部分我们继续检测了SLE患者及健康正常人群(Normal Human Subjects, NHS)外周血单个核细胞(PBMCs)多胺代谢酶基因ODC、SAMDC和SSAT mRNA表达水平及血浆中三种多胺的浓度。旨在进一步探究多胺在SLE患者的表达情况及其在SLE发生发展中的可能作用。研究方法取SLE患者32例,其中女性患者28例,男性4例,其诊断符合1997年美国风湿病学会修订的SLE分类标准；NHS组30例,其中女性26例,男性4例,均为健康体检者。使用实时定量PCR(RT-PCR)技术比较SLE组和NHS组PBMCs ODC、SAMDC和SSAT mRNA表达水平：使用HPLC技术检测SLE组和NHS组血浆精胺、亚精胺和腐胺的浓度。用独立样本T检验和卡方检验进行数据统计分析,RT-PCR结果由Real Time PCR仪自动分析得出SLE组目的基因mRNA对于NHS组目的基因mRNA的相对表达倍数,以P<0.05被认为差异有统计学意义。结果1.SLE组PBMCs ODC mRNA相对表达量为0.723,显著低于NHS组1.000,两组差别具有统计学意义(P<0.05)。2.SLE组PBMCs SAMDC mRNA相对表达量为1.101,NHS组为1.000,但两组差别不具有统计学意义(P>0.05)。3.SLE组PBMCs SSAT mRNA相对表达量为0.664,显著低于NHS组1.000,两组差别具有统计学意义(P<0.05)。4.SLE组血浆腐胺浓度为1.172ug/ml,显著低于NHS组1.570ug/ml,两组差别具有统计学意义(P<O.01)。5.SLE组血浆亚精胺浓度为1.303ug/ml, NHS组为1.710ug/ml,但两组差别不具有统计学意义(P>0.05)。6.SLE组血浆精胺浓度为0.471ug/ml,显著低于NHS组0.603ug/ml,两组差别具有统计学意义(P<0.05)。结论SLE患者PBMCs多胺合成关键酶之一ODC和多胺分解关键酶SSAT mRNA表达水平显著低于健康对照组。SLE患者血浆精胺和腐胺的浓度显著低于健康对照组。多胺与其代谢酶基因及多个因素相互作用,共同调节体内多胺浓度稳定。多胺水平可能与SLE细胞凋亡增加、激素水平异常有关。