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目的:研究脂筏标志蛋白Flotilin-1在小细胞肺癌病人肺癌组织中的表达情况以及对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并探讨Flotilin-1抑制小细胞肺癌细胞发生上皮间质转化(EMT)的可能机制。方法:1应用全细胞指数富集的配基系统进化技术(SELEX)的筛选方法,筛选出多条能特异性识别小细胞肺癌细胞系的核酸适配体C1、C3、C7、C12。2体外合成生物素标记的序列C1、C3、C7、C12作为诱饵,钓取与之结合的蛋白。采用质谱鉴定所结合的蛋白,根据质谱分析得分情况挑选了脂筏标志蛋白FLOT1做后续研究。3应用核酸Pull-down验证FLOT1与C12是否特异性结合。4应用免疫组化检测FLOT1在肺部疾病组织芯片的表达情况。5应用免疫组化检测FLOT1在小细胞肺癌组织中的表达情况。6应用免疫荧光检测FLOT1在小细胞肺癌细胞中的定位。7应用RTCA MP实时细胞功能分析仪、Transwell迁移和Matrigel侵袭实验检测敲低FLOT1对肺癌细胞增殖活性、迁移能力和侵袭能力的影响。8建立稳转细胞系sh NC,sh FLOT1-1,sh FLOT1-2,应用western-blot实验验证细胞敲降效率。9应用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测敲低FLOT1后NCIH446 cells细胞周期的改变。10 Western blot实验检测敲低FLOT1后cyclin D1的表达情况。11对FLOT1进行敲降后,经不同浓度顺铂诱导sh NC,sh FLOT1-1,sh FLOT1-2三组小细胞肺癌细胞,检测三组细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2,Caspase3,PAKT,PARP的表达情况。12应用流式细胞术检测经顺铂诱导后三组稳转细胞系的细胞凋亡情况。13行裸鼠皮下成瘤及裸鼠尾静脉注射实验,检测sh NC,sh FLOT1-1两组裸鼠小细胞肺癌转移情况。14用表达谱芯片寻找sh NC和sh FLOT1-1两组细胞中表达差异的m RNA。15在两组细胞中应用Real-time PCR对表达谱芯片结果挑选出的CDC42、SOX11、CXCR2、Twist2的表达进行验证。16应用Western blot检测TGF-β,H-Ras在sh NC、sh FLOT1-1和sh FLOT1-2三组细胞中的表达情况。结果:1质谱分析结果显示脂筏蛋白FLOT1能够与C12结合。2核酸pulldown结果显示FLOT1与C12特异性结合。3组织芯片免疫组化结果显示FLOT1在大部分肺部疾病中表达上调,在健康人肺组织中不表达或低表达。4小细胞肺癌病人免疫组化显示FLOT1在癌组织中表达上调,在正常组织中不表达或低表达。5免疫荧光结果显示FLOT1大部分定位于细胞膜上,仅少量在细胞浆中表达。6 RTCA MP实时细胞功能分析结果显示,敲降FLOT1后小细胞肺癌细胞NCIH446和NCIH1688增殖活性明显降低(P<0.05)。7 Transwell迁移结果显示,敲降FLOT1后,小细胞肺癌细胞NCIH446和NCIH1688细胞迁移能力降低(P<0.05)。Matrigel侵袭实验结果显示,敲降FLOT1-1后,小细胞肺癌细胞NCIH446和NCIH1688细胞侵袭能力减弱(P<0.05)。8流式细胞术检测结果显示敲低FLOT1后,小细胞肺癌细胞系NCIH446细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05)。9 Western blot实验显示,敲低FLOT1后,小细胞肺癌细胞NCIH446中cyclin D1的表达降低。10 Western blot实验显示,敲低FLOT1后,小细胞肺癌细胞NCIH446在经顺铂处理后Bcl-2,PAKT的表达量增加,且Caspase3和PARP剪切比例增加。11流式细胞术检测结果显示,经顺铂诱导后敲低FLOT1的NCIH446的细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。12裸鼠皮下成瘤实验结果显示,敲降FLOT1-1组皮下肿瘤重量降低(P<0.05)。13裸鼠尾静脉注射实验结果显示:sh-NC组裸鼠肺部发现了大量癌细胞转移,sh FLOT1-1和sh FLOT1-2组肺部未发现或发现少量癌细胞转移灶。14 Real-time PCR结果显示敲低FLOT1后,CDC42、SOX11、Twist2相对表达水平下调。15 Western blot结果显示TGF-β,H-Ras在sh FLOT1-1、sh FLOT1-2两组细胞中的表达相对于在sh NC组表达水平下调。结论:脂筏蛋白FLOT1在小细胞肺癌组织中表达上调,抑制FLOT1的表达能抑制小细胞肺癌细胞增殖活性及克隆形成能力,且能够抑制小细胞肺癌细胞的侵袭和远处转移能力,还可促进小细胞肺癌细胞发生凋亡。此外,下调FLOT1表达可抑制小细胞肺癌细胞发生EMT,该过程可能与抑制TGF-β的表达有关。