DNA疫苗因其能够同时诱导特异性体液免疫应答和特异性细胞免疫应答而成为一种极具发展潜力的疫苗接种技术。应用质粒DNA作为疫苗的成功关键在于选择高效的疫苗接种技术。电脉冲介导的DNA疫苗导入技术不仅可以同时输送多种基因，而且能够极大地提高基因转染的效率，有效地激发免疫应答。 为了深入研究电脉冲介导的DNA疫苗导入技术，我们设计并制造了增强基因输送效率的电脉冲发生器及针式电极导入装置，应用可定量的报道基因检测系统，变化仪器的各种参数，摸索了电脉冲介导的基因输送技术的优化条件。在此基础上，使用针对乙型肝炎的DNA疫苗(该疫苗包括一种编码乙肝病毒表面抗原(HBsAg)上preS2-S蛋白的质粒和一种表达白介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)的融合蛋白)，研究了HBVDNA疫苗在电脉冲介导的基因输送技术的作用下在多种动物模型中的免疫效果，为临床实验和研究提供了良好的基础和依据。 本论文的主要结果总结如下： 1)设计并搭建了一系列电脉冲介导的基因输送实验仪器和电极针。应用模块化设计方法，计算并选择恰当的电子参数，使用先进的弱电对强电的控制技术，设计并制造了可大范围灵活调节各种电学物理参数的电脉冲发生器和具有不同针式电极阵列的导入装置。该系列仪器的电场强度可调范围为0-1200V/cm，单个脉冲可调范围为10μs-100ms，脉冲个数可达999个；并且能够产生多种变换电场极性和高低压组合的波形序列。 2)利用自主开发的电脉冲实验装置，应用荧光素酶报道基因检测系统，进行大量的动物实验，变化各种电学参数，研究其对基因转染率的影响，从而摸索出能够在最大程度上提高基因转染率的合适的物理条件。具体来说，最佳的电场强度范围是100-300V/cm；最佳脉冲个数是6个脉冲；最佳单个脉冲时间为50-100ms。同时发现，电场极性变换的脉冲波形和高低压组合的脉冲波形并没有更明显地增加转染效率。 3)探讨了一些生化条件对电脉冲介导的基因输送效率的影响。验证了短片断DNA和Poly-L-Glutamate能够提高在体电脉冲介导的基因输送技术的转染效率。同时发现，溶液中存在的Ca2+能够大大地抑制电脉冲技术输送的外源基因的表达量，使其降至对照组的5﹪，实验表明，这种抑制效应是钙离子所特有的，并且没有组织特异性。 4)对小鼠和恒河猴进行了电脉冲介导的HBVDNA疫苗免疫效果的研究。研究结果表明，对小鼠来说，一次电转染5μg的DNA疫苗，无需进行免疫增强就能够诱导持续达4个月以上的高滴度体液免疫应答和显著的细胞免疫应答。首次应用灵长类动物恒河猴进行了电介导的HBVDNA疫苗实验研究。结果表明，电脉冲接种0.5mg的DNA疫苗并增强一次后，部分恒河猴个体出现高于保护剂量(10mIU/m1)的抗体应答；随着免疫次数的增加，产生抗体的个体数持续增加；经过三次免疫后，12只接受电脉冲介导的DNA疫苗注射的动物中有10只产生高于保护剂量的抗体滴度；并且，高滴度抗体的持续时间也随免疫次数的增加而增长。应用ELISpot检测技术发现，这些动物体内也诱导了有效的细胞免疫应答。 之后，使用重组蛋白抗原对接种DNA疫苗后的恒河猴进行了刺激，实验结果证明恒河猴可以迅速而高效地对抗原蛋白产生免疫应答反应。