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强力霉素(Doxycycline, DC)为四环素类抗生素,被广泛应用于畜牧生产和水产养殖中。在实际生产中,由于大量的使用和不遵守休药期,造成其在动物组织中的残留。人食用动物产品后,抗生素会在人体内蓄积,对人体健康造成威胁。我国出口的水产品,也因抗菌药物超标的问题,而多次遭到欧盟、美国、日本等国家的抵制。因此有必要建立高效准确的检测方法,加强强力霉素残留的监测力度。本研究主要内容有：DC人工抗原的合成,DC多克隆抗体、单克隆抗体的制备及特性测定,ciELISA方法的建立及其性能测定,蛋白芯片检测方法的初步建立。主要研究结果如下：1.免疫原和包被原的合成与鉴定采用改进碳二亚胺法合成免疫原(DC-BSA)和包被原(DC-OVA),通过紫外光谱扫描法进行鉴定,证明人工抗原合成成功,DC与BSA偶联比为3：1。以DC-BSA免疫BALB/C小鼠,获得的血清多抗用ELISA方法进行检测,结果显示小鼠免疫获得了较高效价、敏感、特异性的抗血清,进一步证明人工抗原偶联成功。2.抗DC单克隆抗体的制备及其免疫学特性的鉴定用DC-BSA免疫BALB/C小鼠,选择免疫效果最好的小鼠作为脾细胞制备鼠,应用小鼠实体瘤制备小鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞,脾细胞和SP2/0细胞在PEG-4000的作用下进行融合,采用间接ELISA和间接竞争ELISA法对细胞的培养上清进测定,筛选阳性细胞,并对阳性细胞通过有限稀释法进行克隆,最后筛选出1株杂交瘤细胞3D1-H4。采用体内诱生法制备含单克隆抗体的腹水,并用辛酸-硫酸铵法进行纯化。间接ELISA法测得杂交瘤细胞培养上清和单抗腹水效价分别为1：8×102和1：5.12×10。。间接竞争ELISA法测得单抗IC50为44.46ng/mL,与四环素、土霉素和金霉素分别有8.87%、5.86%和2.74%的交叉反应率。经鉴定获得的单抗为IgG1型免疫球蛋白。3. ELISA方法建立及性能测定应用获得的单克隆抗体建立了水产品中DC残留的间接竞争ELISA检测方法。标准曲线呈典型的S型,回归方程为y=-0.3591x+1.0602,相关系数R2=0.9919,线性范围为1.58～199.53ng/mL,对DC的IC50为36.31ng/mL,最低检测限为2.88ng/mL。以斑点叉尾鮰组织样品为检测对象,在5、25、50ng/mL的添加水平下,斑点叉尾鮰肌肉样品的回收率为80.88%～90.72%,肝脏样品的回收率为76.40%～84.56%,平均批间和批内变异系数均小于15%,基质影响效应小。表明建立的间接竞争ELISA方法能够满足水产品中DC的残留检测。4.蛋白芯片检测方法的建立以高分子三维基片为载体,DC-OVA为捕获抗原,强力霉素单克隆抗体为一抗,荧光标记羊抗鼠IgG为二抗,构建了强力霉素残留的蛋白芯片检测方法,并对蛋白芯片的制备、反应条件进行了优化。结果表明合适的点样浓度为0.5mg/mL,封闭液为0.1mol/L Tris溶液,一抗稀释度为1：800,二抗稀释度为1：6,一抗、二抗作用时间均为1h。