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绿豆是一种富含蛋白质和黄酮的农作物,已被广泛应用于化妆品中;黑茶属于后发酵茶,含有茶多酚和茶色素等物质。本研究以我国著名富硒地区-湖北恩施的富硒绿豆和富硒黑茶为研究对象,探究富硒绿豆发酵液的美白、保湿和抗氧化活性,并且对富硒黑茶的抗氧化和抑菌活性进行了初步探索。主要研究结果如下所示:(1)经微生物发酵的富硒绿豆发酵液,其硒含量为0.003 ppm,总氮含量为18.96 mg/mL,γ-氨基丁酸(γ-GABA)含量为195356.08 nmol/mL。DPPH、ABTS自由基清除实验中,高浓度的富硒绿豆发酵液对DPPH和ABTS自由基的清除率分别为96.87%和99.66%;体外酪氨酸酶抑制实验中,40μL的富硒绿豆发酵液对酪氨酸酶的抑制率就达到了80.72%;进一步测定小鼠黑色素瘤细胞(B16F10)中黑色素的含量,发现8%浓度的富硒绿豆发酵液可以使细胞中的黑色素含量下降至66.79%;成纤维细胞(HFF-1)中水通道蛋白AQP3含量测定实验,结果显示,1.56%,3.13%和6.25%浓度的富硒绿豆发酵液处理细胞后,细胞中AQP3基因的表达量分别为1.86,3.12,4.23,相较于空白组1.02的表达量,AQP3基因的表达量显著增加。证明富硒绿豆发酵液具有明显的体外抗氧化、美白和保湿功效。(2)皮肤刺激性试验结果显示,4只豚鼠皮肤表面正常,未见红斑、焦痂和水肿等不良反应出现;急性眼刺激试验结果显示,3只受试家兔的眼睛,结膜未出现充血、水肿等情况,角膜清晰,虹膜正常,也没有出现水肿至眼睑近半闭合或者大半闭合等眼损害问题;皮肤变态反应试验结果显示,20只受试豚鼠在经历了诱导接触和激发接触之后,其皮肤没有出现红斑、焦痂和水肿。富硒绿豆发酵液中汞(Hg)、铅(Pb)、镉(Cd)均未检出,砷(As)也仅为0.115 ppm,远远小于《化妆品卫生规范2015版》相关规定限量2 ppm。以上实验结果表明富硒绿豆发酵液对皮肤、眼睛为零刺激性,不存在安全性问题,可以很好的应用到护肤品中。(3)以富硒绿豆发酵液为主要功效性物质的面贴膜,提供给31名18-60周岁的女性使用4周,在0周,2周和4周的时候对受试者皮肤进行测定,以受试者面部皱纹数量、皱纹体积、皱纹面积和皱纹长度为抗衰指标,受试者面部L*、b*、ITA°和黑色素含量的变化是皮肤的美白指标,皮肤角质层含水量(CORNE)和经皮水分流失率(TEWL)为保湿指标。结果表明,皱纹的数量、面积和长度都有显著性降低;而皱纹体积在使用2周时是没有明显变化的,使用4周后明显降低。代表皮肤黑白度的L*值、ITA°值显著变大,黑色素含量显著降低,而表示皮肤黄度的b*值没有明显差别。长效保湿结果表明受试者皮肤角质层含水量(CORNE)显著增加,经皮水分流失率(TEWL)的明显下降;短效保湿测试显示皮肤CORNE值增加。以上结果证明了富硒绿豆发酵液在人体上具有优异的抗衰、美白和保湿的效果。(4)富硒黑茶提取物的成分分析结果表明,硒、茶多糖、茶多酚和黄酮类等物质含量较高,含量分别为0.18 ppm,24.88%,25.42%和21.1%,茶色素含量较低。0.32 mg/mL的富硒黑茶提取物,对DPPH、ABTS自由基的清除率分别为92.73%和98.43%。0.08 mg/mL的富硒黑茶提取物可以将被2μM H2O2刺激的成纤维细胞(HFF-1)的存活率从63.32%提升至79.83%;H2O2处理过的细胞中ROS、SOD、MDA的含量分别为38.67%,1.08 U/102Cell和13.75 nmol/102Cell,经一系列浓度的富硒黑茶提取物处理细胞后,ROS和MDA显著减少,SOD显著增加,至0.08 mg/mL时,ROS、SOD、MDA的含量分别为24.10%,2.01 U/102Cell和9.35 nmol/102Cell。三者的测定结果表明,富硒黑茶提取物可以通过抑制细胞中自由基的生成,促进自由基的清除代谢等途径达到抗氧化效果。抑菌实验结果表明,富硒黑茶提取物在0.4 g/mL的时候,对黄色葡萄球菌和绿脓杆菌有抑制作用,而对大肠杆菌和白色念珠菌则无抑制作用,表明富硒黑茶提取物对有害菌的抑制作用并不明显。汞、砷、铅和镉的含量分别为0.004 ppm,0.058 ppm,0.82ppm和0.104 ppm,均小于规定范围。皮肤刺激性试验,眼刺激性试验以及皮肤过敏性试验证明了2%的富硒黑茶提取物的安全性。