LOX对胃癌细胞VM的作用及与PDGFR的关系

来源 :宁夏医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:farmeress
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目的:以胃癌细胞为研究对象,探讨赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)和血小板衍生生长因子受体(platelet derived growth factor receptor,PDGFR)对胃癌细胞血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)的影响;并分析胃癌血管生成拟态的形成中LOX与PDGFR的关系。  方法:培养胃癌细胞MGC-803和BGC-823。添加不同浓度LOX后,体外划痕实验检测LOX对BGC-823迁徙能力的影响;外源性加入不同浓度的LOX和用LOX的抑制剂β-氨基丙腈(beta-aminopropionitrile,BAPN)作用胃癌细胞后检测胃癌细胞VM的形成情况;用PDGFR的抑制剂AG1295、AG1296作用胃癌细胞后检测胃癌细胞VM的形成情况;用不同浓度LOX和BAPN作用于胃癌细胞后,Western-Blot检测PDGFR-α和PDGFR-β的表达情况;用AG1295、AG1296完全抑制PDGFR后添加不同浓度LOX和BAPN,检测胃癌细胞VM的形成情况。  结果:1、体外划痕实验表明,2.5nM的LOX从8h开始就可以促进BGC-803的迁徙,随着LOX的增加,胃癌细胞的迁徙能力增强;无血清培养下,添加2.5nM的LOX24h后细胞迁徙能力开始增强,而添加5nM的LOX自8h即可增强细胞的迁徙(p<0.05)。  2、体外二维细胞培养PAS染色表明,2种胃癌细胞株,随着LOX浓度的增加,VM形成的数量也增加,LOX浓度与VM的形成呈正相关(rMGC-803=0.847和rBGC-823=0.851,P<0.05);VM的形成可被BAPN抑制,随着BAPN的浓度增加,VM形成的数量相应减少,BPAN与VM的形成呈现负相关(rMGC-803=-0.791和rBGC-823=-0.834,P<0.05)。  3、体外三维培养检测表明,2种胃癌细胞株,随着LOX浓度的增加,VM形成的数量也增加,LOX浓度与VM的形成呈正相关(rMGC-803=0.910,rBGC-823=0.742,P<0.05);同样,随着BAPN的浓度增加,VM形成的数量相应减少,BPAN与VM的形成呈现负相关(rMGC-803=-0.779,rBGC-823=-0.894,P<0.05)。  4、体外二维培养PAS染色检测表明BGC-803中随着AG1295、AG1296的浓度增加,VM形成的数量减少,AG1295、AG1296浓度与VM的形成呈负相关(rAG1295=-0.733,rAG1296=-0.792,P<0.05)。  5、Western-blot结果表明,2种胃癌细胞株中,添加LOX可以促进PDGFRα和β的表达,24小时添加LOX(r803-LOX-PDGFR-α=0.813,p<0.01;r803-LOX-PDGFR-β=0.829,p<0.01;r823-LOX-PDGFR-α=0.023,p>0.05;r823-LOX-PDGFR-β=0.109,p>0.05);48小时添加LOX(r803-LOX-PDGFR-α=0.721,p<0.01;r803-LOX-PDGFR-β=0.716,p<0.01;r823-LOX-PDGFR-α=0.904,p<0.01;r823-LOX-PDGFR-β=0.914,p<0.01);而添加BAPN抑制LOX活性后,PDGFRα和β的表达量相对减少,24小时添加BAPN(r803-BAPN-PDGFR-α=-0.935,p<0.01;r803-BAPN-PDGFR-β=-0.560,p<0.01;r823-BAPN-PDGFR-α=-0.377,p<0.01;r823-BAPN-PDGFR-β=-0.687,p<0.01);48小时添加BAPN(r803-BAPN-PDGFR-α=-0.793,p<0.01;r803-BAPN-PDGFR-β=-0.872,p<0.01;r823-BAPN-PDGFR-α=-0.301,p<0.05;r823-BAPN-PDGFR-β=-0.858,p<0.01)。  6、体外二维培养PAS染色检测表明,2种胃癌细胞株,应用AG1295、AG1296完全抑制PDGFR后,随着LOX浓度的增加,VM形成的数量也增加,LOX浓度与VM的形成呈正相关(rMGC-803-AG1295=0.878,rBGC-823-AG1295=0.825,rMGC-803-AG1296=0.935,rBGC-823-AG1296=0.881,均P<0.05);而加入BAPN无VM形成。  7、体外三维培养检测表明,2种胃癌细胞株中,应用AG1295、AG1296完全抑制PDGFR后,随着LOX浓度的增加,VM形成的数量也增加,LOX浓度与VM的形成呈正相关(rMGC-803-AG1295=0.927,rBGC-823-AG1295=0.935,rMGC-803-AG1296=0.945,rBGC-823-AG1296=0.926,均P<0.05);加入BAPN后仍无VM形成。  结论:LOX可以增强胃癌细胞的运动,促进胃癌细胞株VM的形成,以促进胃癌的侵袭和转移;PDGFR可以促进胃癌细胞VM的形成。LOX对胃癌细胞PDGFR的表达有一定促进作用。抑制PDGFR后,外源性添加LOX仍可以促进胃癌细胞VM的形成。
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