以本实验室保存的一株芽孢杆菌M0658为出发菌，通过NTG诱变和原生质体融合技术最终筛选出一株L-Met高产菌R0725。在适宜的条件下，R0725平均积累L-Met达1.38g/l，比出发菌M0658L-Met的产量提高约40％。 在NTG诱变实验中，通过青霉素浓缩法筛选到两株营养缺陷型菌株M0876(Thr-)和M0923(lys-)。其诱变条件为：NTG浓度为200μg/ml，37℃下处理30分钟。青霉素富集条件为：青霉素浓度为2000U/ml，作用时间为4h。 以M0876，M0923作为原生质体融合的亲本，对亲本原生质体形成及再生条件进行了优化。通过实验得到优化条件为：青霉素浓度为2.0u/ml,作用时间4h；溶菌酶的浓度0.5mg/ml,作用时间为3h。其再生时在原生质体液中加入1％的BSA，用蔗糖作为培养基稳定剂并采用夹层法培养。在此条件下，M0876及M0923原生质体形成率分别达到96.4％和97.1％，再生率达到75.3％和72.1％。 在上述条件下制备原生质体后，通过原生质体融合技术选育L-Met高产菌。考察了影响原生质体融合的主要因素：CaCl2浓度、PEG浓度和作用时间、以及pH值等。通过正交实验确定最终确定以40％PEG(分子量6000)、30mMol/l的Ca2+、pH8.0、37℃下诱导融合30min，并采用夹层法培养，融合率达到2.21×10-5。 原生质体融合后，对在选择培养基长出的融合子进行了十次重复性传代实验，筛选出11株稳定融合子。在适宜条件下对融合子进行发酵，得到一株L-Met高产菌R0725。经洗脱法测定R0725L-Met的产量最高达到1.42g/l。随后对融合子R0725进行了初步的鉴定。主要从菌落形态及大小，生长特点及L-Met的产量稳定性等方面进行分析。