论文部分内容阅读
[目的]
探讨拟亨廷顿病模型大鼠行为学改变，学习记忆能力改变，脑纹状体部位组织病理学改变，及该部位的脑源性神经营养因子(BDNF)的改变情况及灵芝孢子粉的干预作用。
[材料与方法]
1.材料健康SD大鼠(250-280)克，3硝基丙酸(3nitropropionicacid,3NPA)，抗BDNF抗体，免疫组化试剂盒，倒置显微镜，冰冻切片机，Morris水迷宫。
2.方法：2.1建立亨廷顿大鼠模型及行为学和病理组织学观察
2.1.1实验分组：HD模型组：蒸馏水灌胃5天——腹腔注射3NP(2Omg/kg体重)，隔日注射一次，共注射10次。同时蒸馏水灌胃。
灵芝组：灵芝孢子粉0.4g/100g体重灌胃5天后——腹腔注射3NP(20mg/kg体重)隔日注射一次，共注射10次。同时灌服灵芝孢子粉。
正常对照组：蒸馏水灌胃5天—腹腔注射生理盐水。隔日注射，共注射10次。同时蒸馏水灌胃。
2.1.2观察上述各组的行为学，评分，应用spss12.0，应用重复测量数据的方差分析进行统计分析；处死取脑纹状体进行病理组织学观察。HE染色。
2.2免疫组化法对纹状体去BDNF的定性检测
2.2.1实验分组：同1.1，25日后处死大鼠，4％多聚甲醛固定，蔗糖脱水，冰冻切片。
2.2.2应用免疫组化法检测BDNF，阳性神经元的数量变化。
2.2.3利用SPSS统计软件12.0，应用单因素方差分析方法进行处理和分析，P＜0.05有统计学意义。
2.3Mirror水迷宫检测大鼠学习记忆能力
测量大鼠的逃避潜伏期，并用SPSS12.0重复测量数据的方差分析方法进行分析。P＜0.05有统计学意义。
3结果
3.1灵芝孢子粉对HD模型鼠的脑皮质和纹状体结构影响正常组纹状体神经细胞结构清楚，组织正常。
HD模型组纹状体神经元细胞出现变性，尼氏体溶解，染色质凝块，边聚，；核固缩，核碎裂及凋亡小体多见。
灵芝孢子粉组：纹状体神经元有变性，存在核浓染，染色质加深现象，但较HD模型组纹状体病变轻。
灵芝组与HD模型组纹状体凋亡坏死细胞个数/HP比(12.56±4.37vs21.13±7.62)P＜0.05，有统计学意义。
行为学评分：灵芝组：1.7±0.95，HD模型组：4.2±0.92，P＜0.05，有统计学意义。
3.2Mirror水迷宫实验灵芝孢子粉组的逃避潜伏期为27.15±30.82s，HD模型组的逃避潜伏期为53.64±47.30s，P＜0.05，有统计学意义。三穿环指数，灵芝孢子粉组6.4±3.41次，HD模型组为2.3±2.81次，二者比较，P＜0.05，有统计学意义。
3.3免疫组化法检测纹状体区BDNF阳性细胞表达
纹状体区脑源性神经营养因子表达的观察，正常对照组(204.51±57.16个/HP)，灵芝孢子粉组阳性神经元(152.37±41.12个/HP)，HD模型组BDNF阳性神经元(76.07±25.34个/HP)对照组与HD模型组比较，P＜0.01。而灵芝组与HD模型组比较，P＜0.05，有统计学意义。
[结论]
1经过3-硝基丙酸处理后，大鼠出现平衡障碍，共济失调，纹状体神经元缺失，凋亡，坏死。提示氧化应激是HD的一个重要机制，三硝基丙酸模型是一个较好的HD模型。
2灵芝孢子粉能够减轻神经元细胞的凋亡，缺失，坏死，能改善大鼠的行为学，提高记忆力。
3灵芝孢子粉能够维持纹状体BDNF阳性神经元的表达，具有脑保护作用。