人类基因组计划（HGP）的开展和实施，带来了生物技术上的革命。一些相关的学科，例如生物信息学、比较基因组学、结构基因组学、功能基因组学和蛋白质组学应运而生。随着人类和一些重要模式生物测序任务的相继完成，其相应的研究任务已经由结构基因组学研究转向功能基因组学研究。梨基因组研究在人类基因组和其他一些模式植物基因组计划的影响下，正在采用结构和功能基因组研究并重的技术路线，不断完善遗传图谱饱和密度的同时，努力加强梨功能基因组学研究，为利用基因工程技术进行梨的遗传改良，满足人们日益增长的果品需求奠定坚实的基础。 本试验通过吸光比值分析和凝胶电泳比较了改进异硫氰酸胍法、热硼酸法、改良CTAB法和Qiagen Rneasy试剂盒四种提取总RNA的方法提取梨果实组织总RNA的可行性。结果表明：改进异硫氰酸胍法获得的总RNA纯度高、完整性好。其吸光比值的比值OD₂₆₀／OD₂₈₀在1.7～2.0之间，OD₂₆₀／OD₂₃₀大于2。电泳检测显示28S、18SrRNA条带清晰，且28S亮度明显大于18S。其它方法提取的总RNA吸光比值OD₂₆₀／OD₂₈₀均小于1.7，OD₂₆₀／OD₂₃₀均小于2.0。说明产物中有不同程度的多糖、多酚和蛋白的污染。 利用M-MLV反转录酶把总RNA中的mRNA反转录成cDNA，并合成双链cDNA。然后用SPIN-400Column对cDNA进行分级分离，去除小于500bp的cDNA片段。在双连cDNA两端加上接头，与载体λgt11连接，用Gigapack Gold Ⅲ Packaging Extract包装。包装产物侵染Y1088后构建cDNA文库，最后进行文库扩增。该文库的滴度为1.192×10⁶，文库克隆数为1.151×10⁶。插入片断平均大小为1kb左右，蓝白斑筛选证实其重组率大于93％。完全符合cDNA文库的要求。