论文部分内容阅读
目的:通过对怀菊花进行产地及市场调查,以怀菊药材的传统分级方法为依托,结合现代科学研究技术,对怀菊花样品进行规格等级划分及质量特征研究。方法:首先,对收集到的48份怀菊花样品的形状、大小、色泽、质地及气味等性状特征进行描述,主要根据怀菊花的品种、大小对样品进行分类,进而得到134份样品;其次,依据2015版《中国药典》对不同商品规格怀菊花进行性状鉴别、显微鉴别及薄层鉴别,利用ITS2 DNA条形码对不同商品规格怀菊花进行分子鉴定;按照2015版《中国药典》对不同商品规格怀菊花进行水分检查,运用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）对不同商品规格怀菊花样品中的Pb、Cr、As、Hg、Cu五种重金属及有害元素进行限量检查;应用高效液相色谱法（HPLC）对不同商品规格等级怀菊花中绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸三个指标性成分进行含量测定,应用紫外分光光度法（UV）-比色法对不同商品规格等级怀菊花中总黄酮进行含量测定,采用水蒸气蒸馏法对不同商品规格等级怀菊花挥发油进行含量测定,并运用SPSS统计软件中的方差分析对五个化学指标进行分析;最后,以气相色谱-串联质谱法（GC-MS）结合NIST标准质谱图库对挥发油成分进行分析,并应用化学计量学中的偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA）进行验证;采用HPLC法对怀菊花水溶性化学成分进行指纹图谱研究。结果:最终将收集到的怀菊花样品分为了大白菊、小白菊、小黄菊、珍珠菊四个商品规格,其中大白菊、小白菊、小黄菊各分为三个等级,珍珠菊分为两个等级。不同商品规格怀菊花显微鉴别均含有花粉粒、T形毛、无柄腺毛、草酸钙簇晶、苞片表皮、花粉囊内壁细胞、药膈基部细胞等特征。薄层鉴别结果显示,大白菊、小白菊、小黄菊及珍珠菊供试品色谱在与对照药材色谱和绿原酸对照品色谱相应的位置上,均显相同颜色的荧光斑点。分子鉴定结果显示,ITS2 DNA条形码无法将四个商品规格怀菊花予以准确鉴别。各样品水分均符合中国药典标准。重金属及有害元素结果显示:5、8、9、10号大白菊及22号小白菊样品Pb大于5.0 mg·kg-1,四个规格Cd均大于0.3 mg·kg-1。在化学成分上,方差分析结果显示,不同商品规格之间具显著差异,同一商品规格不同等级之间差异不明显。挥发油成分GC-MS分析,共鉴定出49个化合物,其中共有成分为32个,主要为单萜类和倍半萜类及其含氧衍生物,偏最小二乘法判别分析结果将样品区分为三类,小白菊和小黄菊归于一类,大白菊和珍珠菊分别单独归于一类。分别建立了大白菊、小白菊、小黄菊、珍珠菊水溶性成分指纹图谱,并选取大白菊、小白菊、小黄菊各10批建立了怀菊花水溶性成分指纹图谱。结论:本研究可为怀菊花的商品鉴别及临床应用提供参考依据。