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目的：肝癌是世界上致死率最高的肿瘤之一,主要分布于我国、非洲撒哈拉沙漠和东南亚等地区,在大洋洲及欧美地区相对少见,全球每年新增肝癌患者超过60万人,其中50%在我国,并且我国每年有近30万人死于此病,占全世界肝癌死亡人数的一半以上。但目前关于肝癌的发生发展机制尚未得到完全阐明,极大的迟滞了肝癌防治水平的提高。生物节律是生物体中普遍存在的生命现象,参与多种生命活动的调控,生物节律调控的异常与肿瘤的发生发展关系密切,而生物节律基因参与肝癌发生进展的作用研究尚未得到广泛开展。Timeless是一个重要的生物节律基因,它不仅是细胞周期和生物节律的重要连接者,而且能够影响其它节律基因(Per家族和Cry家族)的表达水平变化,同时,Timeless通过ATM-Chk2和ATR-Chk1两条信号转导通路促进DNA的损伤修复。Timeless在生物节律、细胞周期和胚胎发育中的诸多生物学功能,以及在不同癌组织中表达水平变化的不一致性,促使我们探讨它对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：首先,通过Western-blot检测培养的肝癌细胞HepG2和SMMC-7721中内源性TIMELESS的表达水平,再利用siRNA片段或重组表达质粒的转染降低或升高HepG2细胞中TIMELESS的表达水平,通过MTT、克隆形成、AnnexinV-FITC染色和流式细胞仪检测分析Timeless表达水平变化对肝癌细胞体外增殖和细胞凋亡的影响。结果：(1)在肝癌细胞株HepG2和SMMC-7721中,检测到TIMELESS的内源性表达：(2)通过转染siRNA片段或重组表达载体可以降低或升高肝癌细胞HepG2中的TIMELESS表达水平,筛选到具有显著干涉效果的两条siRNA片段ts2和ts3,片段ts2(200pmol和300pmol)和ts3(50-300pmol)可以明显降低肝癌细胞HepG2中TIMELESS的表达水平,重组质粒pcDNA4-Flag-Timeless能够使重组蛋白Flag-TIMELESS成功在HepG2细胞中过表达；(3)MTT结果显示：Timeless的表达水平降低能够显著促进肝癌细胞HepG2的体外增殖能力。与阴性对照片段NC (200pmol)相比,片段ts2(200pmol)转染3、4和5天后,HepG2细胞的体外增殖能力得到极显著的提高(P<0.01),增长率分别为15.82%、20.26%和11.17%,片段ts2(400pmol)时同样具有显著的促进作用(P<0.05),增长率分别为10.20%、6.32%和6.31%；同样,Timeless的表达水平降低能够显著促进肝癌细胞HepG2的克隆形成能力,与NC (200pmol)的克隆形成率相比,片段ts2浓度为(200pmol和400pmol)时克隆形成率分别增长97%(P<0.05)和125%(P<0.01),与MTT结果相似；(4) AnnexinV-FITC染色和流式细胞仪分析表明,Timeless的表达水平降低能够抑制HepG2细胞凋亡,片段ts2(200pmol和400pmol)转染5天后,HepG2细胞的凋亡率分别为6.79%和5.0%,而NC (200pmol)的凋亡率为12.01%。结论：肝癌细胞HepG2中节律基因Timeless表达水平的降低可增强细胞的体外增殖能力和克隆形成能力,并对细胞凋亡具有抑制作用。这些结果为明确生物节律基因Timeless在肝癌治疗中的作用提供了实验基础。