【摘 要】
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以天然脱碘酶的初步催化机制和疏水腔修饰法的半抗原设计思想为依据,设计合成了三种疏水性不同的甲状腺素衍生物半抗原：o-methyl-T,o-benzyl-T和o-p-nitro-benzyl-T并对其结构
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以天然脱碘酶的初步催化机制和疏水腔修饰法的半抗原设计思想为依据,设计合成了三种疏水性不同的甲状腺素衍生物半抗原：o-methyl-T<,4>,o-benzyl-T<,4>和o-p-nitro-benzyl-T<,4>并对其结构进行了表征.半抗原与载体蛋白偶联制备出全抗原,经免疫Balb/C小鼠、细胞融合、多轮古隆化与筛选,获得一株分泌抗-T<,4>的单抗细胞株4C5和一株分泌抗-o-methyl-T<,4>的单抗细胞株6E8.经腹水制备和分离纯化,获得单克隆抗体4C5和6E8.通过化学组装将催化基团Sec引入到抗体的抗原结合部位,制备出两种分别对半抗原T<,4>和o-methyl-T<,4>特异的含硒抗体酶Se-4C5和Se-6E8,其最大酶活力分别为270和480U/mgprotein,为含天然酶的鼠肝匀浆液活力（36U/mgprotein）的7.5及13.3倍,是国内外首次报道的具有脱碘酶活性的含硒抗体酶.同时对它们的理化性质、酶促反应、动力学性质以及Fab片段的活性等方面进行了系统的研究,用化学修饰法鉴定了催化部位的一些关键氨基酸.指出抗体酶催化的反应与I型脱碘酶相似,属乒乓机制,且PTU抑制作用也相一致,因此确认为I型脱碘酶模拟物,并提出了较详细的脱碘酶催化机制和过滤态的形成过程,这将对天然脱碘酶催化机理的完善和药用价值的模拟酶研究等具有重要意义.
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