论文部分内容阅读
目的：探讨热休克预处理对过氧化氢所致大鼠心肌细胞凋亡和线粒体金属硫蛋白表达的影响。方法：体外培养的H9C2大鼠心肌细胞随机分为3组：①正常对照组(Ctrl组,n=3),心肌细胞中加入含血清DMEM培养基,置于37℃,5%CO2培养箱中3h；②H202损伤组(H202组,n=3),心肌细胞中加入含0.5 mmol/L H2O2的无血清DMEM培养基,置于37℃,5%CO2培养箱中3h；③热休克预处理后H202损伤组(HSR组,n=3),心肌细胞中加入含血清DMEM培养基,用无菌无粉手套包裹心肌细胞培养瓶置于42℃恒温水浴箱中孵育1 h,然后在37℃,5%C02细胞培养箱中恢复6h,将培养瓶中的含血清DMEM培养基吸除并清洗,随后同②组。采用流式细胞术观察各组心肌细胞凋亡情况；并用电子显微镜技术观察各组心肌细胞线粒体结构的改变；用western-blotting技术测定各组心肌细胞线粒体细胞色素C和金属硫蛋白的表达。结果：1、由流式细胞术散点图可见：H202损伤组凋亡和坏死细胞明显比正常组多,热休克预处理组凋亡和坏死细胞少于H202损伤组;荧光图可见：H202损伤组显示凋亡和坏死细胞明显多于正常组,热休克预处理组凋亡和坏死细胞少于H202损伤组。2.电镜结果：正常组可以看到完整的线粒体结构,热休克预处理组线粒体结构有点模糊,但外膜甚至嵴都可见,而H202组线粒体肿胀有空泡,不规则外膜,嵴丢火。3.Western-blotting技术测定各组心肌细胞线粒体细胞色素C的表达：热休克预处理可影响过氧化氢损伤的心肌细胞线粒体细胞色素C的表达。4.Western-blotting技术测定各组心肌细胞线粒体金属硫蛋白表达：热休克预处理组的心肌细胞线粒体金属硫蛋白的表达明显高于H2O2损伤组和正常组。结论：热休克预处理可抑制过氧化氢所致心肌细胞凋亡,金属硫蛋白可能与热休克预处理抑制过氧化氢损伤心肌细胞凋亡有关。