应用RNAi技术沉默基因P21对乳腺癌细胞MCF-7中IKK/IKB/NF-KB信号的影响

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目的探讨通过si P21干扰人乳腺癌细胞株MCF-7细胞后对增殖、药敏、侵袭的影响以及对IKK/IKB/NF-KB通路表达的影响。方法1、培育人乳腺癌细胞株MCF-7细胞,选取对数生长期状态优良的细胞,经由脂质体为载体把si P21导入MCF-7细胞。2、转染后提取蛋白并经由Western-blot方法对P21基因的表达进行检测。3、转染后培养细胞并在不同时间点经由MTT法检测细胞增殖;同法测阿霉素药敏。4、将转染后细胞种植入Transwell小室,检测细胞侵袭力。5、转染后提取蛋白并经由Western-blot方法检测NF-kB信号通路。结果1、通过si P21干扰人乳腺癌细胞株MCF-7细胞后,Western-blot结果表明,si P21转染组相较于阴性对照组细胞,表达P21蛋白量明显下降(P<0.05)。2、MTT法检测显示在细胞转染后,si P21转染组细胞的吸光值在四个梯度时间点分别为(0.63±0.004)、(0.70±0.003)、(0.87±0.005)、(1.32±0.004)。阴性对照组细胞的吸光值在四个时间点分别为(0.60±0.002)、(0.65±0.003)、(0.84±0.003)、(1.39±0.002)。可见转染后细胞生长情况无明显差异。3、MTT法检测显示在细胞转染后,si RNA转染组的细胞在不同浓度阿霉素作用72h之后计算出IC50值为1.513μg/ml。阴性对照组的细胞在不同浓度阿霉素作用之后计算出IC50值为1.530μg/ml。可见转染后细胞阿霉素药敏情况差异不大。4、Transwell检测细胞侵袭力实验中,si RNA转染组细胞穿膜细胞数(26.7±8.50),阴性对照组细胞穿膜细胞数(325.7±38.50),二者之间有统计学意义上的差异(P<0.05)。5、Western印迹法显示表明,si RNA转染组与阴性对照组相比,IKBa、IKKb、NF-KB蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05),P-NFKB蛋白表达量有统计学意义上的差异(P<0.05)。结论1、经过siP21干扰,人乳腺癌细胞株MCF-7细胞中P21蛋白的表达可以被有效抑制。2、下调P21并不影响人乳腺癌细胞株MCF-7细胞的增殖能力及及其对阿霉素的药物敏感性,靶向P21在乳腺癌化疗过程中的意义可能不大。3、下调P21可降低乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力,靶向P21可能减少乳腺癌转移,进而改善乳腺癌患者预后。4、下调P21可降低乳腺癌MCF-7细胞NF-KB磷酸化水平。结合调控P21和NF-KB通路可能是乳腺癌患者潜在而有前途的治疗目标。
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