目的:非酒精性脂肪性肝病(non-alcohol fatty liver disease,NAFLD)是糖尿病患者最常见的并发症之一,其主要的病理特征为肝脏脂肪变性,后者可进一步发展为肝炎、肝硬化甚至肝癌。NAFLD的发病机制尚未明确,目前认为与肝脏胰岛素抵抗(Insulin Resistance,IR)及“二次打击”有关。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal protein kinase,JNK)信号通路相关的炎症因子参与了NAFLD发生的中心环节——肝脏IR及“二次打击”的氧化应激肝损伤,与NAFLD的发生、发展密切相关。肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)作为致炎因子,可诱导JNK信号通路的活化,进而激活核转录因子-κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)的表达,造成肝脏损伤。利拉鲁肽是胰高糖素样肽(glucagon-likepeptide1,GLP-1)类似物,近年研究证实,利拉鲁肽不仅具有促进胰岛素分泌、改善胰岛素敏感性、保护胰岛β细胞、降糖等重要作用,还可以改善肝重、减少肝内脂肪累积。本研究采用高糖高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导具有胰岛素抵抗特点的2型糖尿病大鼠模型,观察TNF-α、JNK磷酸化、NF-κB与2型糖尿病非酒精性脂肪性肝病的关系,探讨利拉鲁肽对2型糖尿病大鼠NAFLD的保护机制。方法:选用健康雄性Wistar大鼠24只,适应性饲养1周后,采用数字表法随机分为正常对照组(NC,n=6)和实验组(EX,n=18),NC组采用标准饲料喂养,实验组采用高脂高糖饲料喂养(含20.0%的蔗糖、10.0%的熟猪油、2.5%的胆固醇、1.0%的胆酸、66.5%标准饲料)。喂养4周后,实验组大鼠隔夜空腹腹腔注射链脲佐菌素(STZ,用前以p H4.4的0.1mol/L柠檬酸缓冲液配成1%的溶液)30mg/kg,NC组仅注射等容积的柠檬酸缓冲液。于实验的第6周,即注射STZ 2周后,空腹8h测尾静脉血糖,选择血糖≥7.8mmol/L者为糖尿病成模标准(18只实验动物中14只造模成功)。将成模糖尿病大鼠按照数字表法随机分为2组:2型糖尿病空白对照组(DM,n=7)、2型糖尿病+利拉鲁肽干预组(LIR,n=7)。LIR组给予利拉鲁肽100μg·kg-1皮下注射,每日二次,NC组和DM组给予等量的蒸馏水皮下注射,每周测体重,共干预治疗8周。于实验第14周末,空腹分别测量体重、血糖,麻醉后心尖取血、分离血清,检测血清中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、TNF-α、NF-κB水平。苏木素伊红(HE)染色观察肝组织病理变化。油红O染色观察肝组织脂肪变性程度。免疫组化法测定大鼠肝组织JNK、磷酸化JNK(p-JNK)的蛋白表达水平。JNK主要阳性表达于肝细胞浆,少量表达于肝细胞核,p-JNK阳性表达于肝细胞核。以人工计数法半定量肝组织内JNK、p-JNK的蛋白表达水平。应用SPSS 13.0软件进行统计分析,所有资料均进行正态性检验及方差齐性检验,正态分布数据以x±s表示,非正态分布数据以中位数(最小值,最大值)表示,正态分布且方差齐的资料,用单因素方差分析(ANOVA)法,组间两两比较采用SNK-q检验,不符合正态检验的资料,采用非参数检验,相关分析用直线相关分析法,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1各组大鼠一般情况:对照组大鼠状态良好,进食量及尿量无明显变化,体重呈逐渐增加趋势。DM组及LIR组大鼠进食量、尿量较NC组有所增加。各组大鼠体重差异无统计学意义(NC 320.7±12.0g;DM326.3±69.6g;LIR组316.3±34.2g;χ2=0.309,P=0.857)。2实验6周末血糖数据对照组大鼠空腹血糖为6.50±0.52mmol/L,实验组为15.90±4.85mmol/L,实验组血糖较对照组明显升高(P<0.01)3实验14周末,三组大鼠各项生化指标正常对照组:FBG 6.33±0.69 mmol/L,TC 2.18±0.39 mmol/L,TG 0.80±0.26 mmol/L,LDL-C 1.24±0.47 mmol/L,HDL-C 1.55±0.33 mmol/L,ALT 19.67±2.16 U/L,AST 104.50±11.48 U/L,TNF-α0.83±0.14 ug/ml,NF-κB 78.68±12.15μmol/L。糖尿病组:FBG 12.99±2.07 mmol/L,TC 4.15±0.41 mmol/L,TG 1.83±0.40 mmol/L,LDL-C 2.53±0.44 mmol/L,HDL-C 0.68±0.23 mmol/L,ALT 139.0±20.74 U/L,AST 150.00±24.75 U/L,TNF-α1.19±0.16 ug/ml,NF-κB 170.22±21.53μmol/L。利拉鲁肽组:FBG 8.87±1.82 mmol/L,TC 3.42±0.82 mmol/L,TG 1.20±0.30 mmol/L,LDL-C 1.86±0.28 mmol/L,HDL-C 0.92±0.11 mmol/L,ALT 67.14±8.11 U/L,AST 164.70±25.49 U/L,TNF-α0.95±0.06 ug/ml,NF-κB 116.14±32.63μmol/L。与NC组相比,DM组大鼠血清FBG、TC、TG、LDL-C、ALT、AST、TNF-α、NF-κB水平明显升高(均P<0.05),HDL-C水平显著降低(P<0.05)。经利拉鲁肽干预8周后,LIR组大鼠血清中FBG、TC、TG、LDL-C、ALT、TNF-α、NF-κB均较DM组明显降低(均P<0.05),HDL-C及AST较DM组分别有上升和降低的趋势,但组间差异无统计学意义(PHDL-C=0.070;PAST=0.228)。4各组肝组织病理染色结果HE染色可见NC组大鼠肝组织中有大小一致的肝细胞围绕在肝小叶中央静脉周围,呈放射状整齐排列,肝索结构完整;DM组肝细胞肝索结构紊乱,肝细胞浊肿、气球样变,小叶内散在肝细胞点、灶状坏死;LIR组肝细胞气球样变、炎症活动程度较DM组明显改善。油红O染色可见NC组大鼠肝细胞胞浆呈蓝色,无脂滴;DM组大鼠肝组织内可见中央静脉、汇管区肝细胞内充满红色脂滴,肝组织弥漫脂肪变性;LIR组可见肝细胞内红色脂滴明显减少。5各组免疫组化结果3组大鼠间p-JNK/JNK蛋白表达水平有显著差别(χ2=12.606,P=0.002)。和NC组相比,DM组大鼠肝脏组织p-JNK/JNK蛋白表达水平显著升高(Z=-2.935,P=0.003),经利拉鲁肽干预8周后,LIR组肝脏组织p-JNK/JNK蛋白表达水平较DM组明显降低(Z=-2.859,P=0.004)。Spearman相关分析结果显示,肝脏组织p-JNK/JNK和血清TNF-α、NF-κB的表达均呈正相关(r=0.518,P=0.019;r=0.529,P=0.012)。结论:1JNK的过度激活参与了糖尿病非酒精性脂肪肝病的发生发展;2利拉鲁肽通过降低JNK的磷酸化,减轻炎症反应,改善糖尿病非酒精性脂肪肝病。