【摘 要】
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目的：探讨TNF-α在冻融PMN介导VEC损伤中的作用，为阐明冻伤发病机制提供新的依据。方法：以右旋糖酐沉降法分离的大鼠PMN和体外培养的大鼠VEC为实验材料，建立细胞冻融模型。采用双
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目的：探讨TNF-α在冻融PMN介导VEC损伤中的作用，为阐明冻伤发病机制提供新的依据。方法：以右旋糖酐沉降法分离的大鼠PMN和体外培养的大鼠VEC为实验材料，建立细胞冻融模型。采用双夹心ELISA法检测TNF-α含量。通过测定培养液中LDH活性来确定VEC损伤程度，采用活性染料吞噬法检测PMN-VEC粘附，以流式细胞术检测冻融PMN表面LFA-1表达，采用TUNEL及荧光染色技术检测细胞凋亡。结果：1．冻融VEC的TNF-α分泌量增加。冻融PMN与正常VEC粘附促进TNF-α分泌。2．TNF-α上调冻融PMN表面LFA-1表达，促进冻融PMN与正常VEC粘附，加重VEC损伤。抗LFA-1Mab可部分阻断冻融PMN与正常VEC粘附，减轻VEC损伤。3．TNF-α可诱导冻融PMN和正常VEC凋亡，TNF-α浓度在250-3000U／ml范围内细胞凋亡有剂量依赖趋势，2000U／ml以上浓度的TNF-α在一定程度上影响着冻融PMN与正常VEC粘附及VEC损伤。结论：VEC冻融及PMN-VEC粘附过程中生成的TNF-α促进PMN表面LFA-1表达，增强PMN-VEC粘附，加重VEC损伤。抗LFA-1Mab可部分阻断细胞粘附而减轻VEC损伤。TNF-α还可通过诱导细胞凋亡导致细胞死亡。
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