【摘 要】
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为了满足工业上利用淀粉生产糖过程中所需的耐高温α-淀粉酶,本论文以云南腾冲高温热泉环境下分离到的耐高温菌株为研究材料,对云南大学省微生物研究所菌种库中产淀粉酶的高
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为了满足工业上利用淀粉生产糖过程中所需的耐高温α-淀粉酶,本论文以云南腾冲高温热泉环境下分离到的耐高温菌株为研究材料,对云南大学省微生物研究所菌种库中产淀粉酶的高温菌通过平板初筛、液体复筛,最终得到一株产酶量较高的菌株YIM342.通过形态、生理生化以及分子生物学实验将其鉴定为Anoxybacillus sp. YIM342.为了提高该菌株的产酶量,我们在单因素法确定最佳的碳、氮源的基础上,利用响应面法对所有能影响酶产量的因素进行了优化,并最终获得了最佳产酶条件。最佳条件为:可溶性淀粉11.73g/L,CaCl20.65g/L,发酵时间为37.27h,胰蛋白胨5g/L, MgSO40.5g/L,起始pH值6.5,温度55℃。在此条件下,α-淀粉酶产量得到了很大的提高,达到62.71U/mL,较初始产酶量(19.30U/mL)提高了3.25倍。通过超滤、硫酸铵沉淀以及一步凝胶层析获得了电泳纯的a-淀粉酶,该酶的分子量为68kD,纯化倍数是32倍,回收率为10.4%。对其酶学性质研究表明:该酶是一种内切型α-淀粉酶,最适的底物为直链淀粉;Ca2+离子对酶活有促进作用;纯酶的Km和Vmax分别为4.18mg/ml和7.48μmol/min/mg;最佳的反应温度和pH分别为80℃和9.0,并且具有很好的耐热性和耐碱性,这些独特的性质使得其在食品、纺织、洗涤剂等行业具有较好的应用前景。为了进一步研究该耐高温α-淀粉酶,我们对其N端的氨基酸序列进行了测序,得到了Ala-Gly-Asn-Leu-Asn-Phe这一序列。将此序列在线比对,发现与其它已发表的α-淀粉酶的N端相似度很低,暗示它是一个潜在的新酶。
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