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本试验旨在研究黄芪多糖对犬血清免疫球蛋白和细胞因子水平、肠道分泌型IgA、TLR4、TLR7、My D88、TRAF-6以及AP-1蛋白的表达和犬盲肠微生物群落组成的影响,探究其对犬肠道免疫机能的作用机理。18只1岁龄比格犬,随机分为3组,每组6只,即对照组(只饲喂基础日粮)、低剂量组(基础日粮+1%黄芪多糖)和高剂量组(基础日粮+2%黄芪多糖),试验期14 d。第0、7、14 d,所有犬前肢静脉采集血液。第14 d,所有犬解剖采样,采集十二指肠、空肠中段以及回肠保存于4%多聚甲醛和液氮,并无菌采集盲肠内容物于液氮中保存备用。用ELISA法检测血清中免疫球蛋白和细胞因子水平,免疫组化、荧光定量PCR和蛋白质印迹检测犬肠道中分泌型IgA、TLR4、TLR7、My D88、TRAF-6以及AP-1蛋白的表达情况,高通量测序检测盲肠微生物菌群的变化。试验结果如下:(1)ELISA结果显示,与对照组相比,黄芪多糖组犬血清中三种免疫球蛋白(IgA、IgG和IgM)和γ干扰素水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);低剂量组犬血清中白细胞介素-2、白细胞介素-4和白细胞介素-6水平显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),高剂量组极显著升高(P<0.01)。低剂量组与高剂量组之间差异不显著(P>0.05)。(2)免疫组化、荧光定量PCR以及蛋白质印迹(Western–Blotting)结果显示,与对照组相比,低剂量组犬十二指肠、空肠和回肠内分泌型IgA蛋白表达光密度值、蛋白表达及其m RNA相对表达量显著升高(P<0.05),高剂量组显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);低剂量组犬十二指肠中TLR4、TLR7、My D88、TRAF-6和AP-1蛋白表达光密度值、蛋白表达及其m RNA相对表达量显著升高(P<0.05),高剂量组显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01)。低剂量组与高剂量组之间差异不显著(P>0.05)。(3)高通量测序结果显示,从对照组、低剂量组和高剂量组三组犬盲肠9个样品中共获得885399条Tags,得到OTU数为1710个,对照组559个,低剂量组573个,高剂量组578个。主成分1(PC1)对检测到的总微生物的代表性贡献率为48.44%,主成分2(PC2)的贡献率为22.13%。黄芪多糖组微生物群落组成发生改变,主要表现为放线菌门(Actinobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes)数量增加,梭杆菌门(Fusobacteria)与变形菌门(Proteobacteria)数量减少;放线菌纲(Actinobacteria)与芽孢杆菌纲(Bacilli)数量增加,梭杆菌纲(Fusobacteriia)与β-变形菌纲(Betaproteobacteria)数量减少;双歧杆菌科(Bifidobacteriaceae)、普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)与乳杆菌科(Lactobacillaceae)数量增加,梭杆菌科(Fusobacteriaceae)数量减少;普氏菌属(Prevotella)与乳酸杆菌属(Lactobacillus)数量增加,梭杆菌属(Fusobacterium)数量减少。试验结果表明,饲喂黄芪多糖可通过增加犬血清中免疫球蛋白和细胞因子水平、肠道分泌型IgA表达以及Toll样受体信号通路相关蛋白的表达量,并且改变盲肠内微生物群落的组成,增加有益菌群所占比例,降低条件致病菌比例,以发挥其增强免疫力的作用。