太子参细胞悬浮培养及其皂苷的提取与分析

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 9次 | 上传用户:iamwoceo
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本研究以太子参的幼叶为外植体,诱导培养获得太子参愈伤组织,从而建立太子参细胞悬浮系并从中提取、分离出太子参皂苷;研究不同水平或组合的激素、氮源、磷源、碳源、肌醇、细胞接种量等因素对太子参细胞生长及其皂苷合成的影响,从而建立太子参细胞生长及其皂苷合成的动态曲线,通过太子参细胞悬浮获得最高太子参皂苷产量。研究结果如下: 1.用MS/NB+BA0.2mg·L-1+2,4-D1.0mg·L-1+KT1.0mg·L-1液体培养基可获得大量繁殖速度快、生长均匀一致的悬浮细胞。 2.由细胞悬浮培养获得的太子参皂苷的HPLC色谱峰值与常规种植及组培苗的相同,但纯度较好。细胞悬浮培养约30d时,培养1g干重细胞的培养液可提取总皂苷量为2.13-2.92mg,略低于大田常规种植所收获的每克干重太子参块根内的总皂苷含量(3.6-4.3mg),与组培苗收获的太子参块根内的总皂苷含量相近。 3.太子参细胞悬浮培养培养条件优化结果表明:以5.0mmol·L-1KH2PO4+0.5mmol·L-1(NH42SO4+2.06mmol·L-1CaCl2+200mg·L-1肌醇+40g·L-1蔗糖改良的NB为基本培养基,激素配方为2,4-D1.0mg·L-1+NAA3.0mg·L-1+KT0.5mg·L-1,配合每20mL培养液接种0.03g(DW)左右的细胞液,为最适培养条件。 4.以最适培养条件进行培养,建立太子参细胞生长与皂苷合成的动态曲线结果表明:在第24d太子参细胞生长到达曲线顶峰,即可获最大的太子参细胞生物量,0.3578g(DW)·20mL-1。此后,太子参细胞生长量开始下降,而太子参皂苷含量开始迅速增加,在第45d达到皂苷产量的最大值329.7147mg·20mL-1
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