肺炎克雷伯氏菌是一种条件致病菌，过去人们认为对畜禽危害不大，一直未引起重视。但是近年来关于肺炎克雷伯氏菌引起毛皮动物疾病的报道却在迅速增加，加之各种抗菌药物的广泛使用，导致该菌的耐药性增强，多重耐药菌株的出现，肺炎克雷伯氏菌病在毛皮动物养殖业中危害越来越严重，因此随着环境的改变，肺炎克雷伯氏菌作为人畜共患传染病的病原，应引起广泛的重视。本研究对肺炎克雷伯氏菌在传统的理化特性鉴定基础上，又对12株不同动物来源的代表性菌株进行了23S rRNA基因序列的分析、构建了系统发育树，比较各菌种属间的差异，为肺炎克雷伯氏菌在分子水平的系统学研究和遗传多样性研究奠定基础，建立了一种快速、简便的肺炎克雷伯氏菌的鉴定方法和23S rRNA基因序列分析方法。由于目前市场上尚没有有效的肺炎克雷伯氏菌疫苗用于该病的防治，致使该病得不到合理有效的防治，严重制约着毛皮动物养殖业发展。因此本研究分别以泰山松花粉多糖、蜂胶等为佐剂，利用微胶囊技术制备了肺炎克雷伯氏菌微胶囊疫苗，并口服免疫小白鼠，检测免疫指标，对于肺炎克雷伯氏菌的防治具有重要意义，同时为新型口服疫苗和控释制剂的开发奠定了基础。1.山东部分地区毛皮动物肺炎克雷伯氏菌分离鉴定及系统发育分析为确诊近两年造成毛皮动物（狐狸、貉子、水貂）死亡的主要细菌性病原，本研究在流行病学调查基础上，对新鲜病死毛皮动物进行临床症状观察、病理学检查，同时取病变组织肝、肺、气管为材料分离纯化细菌，对所分离的细菌进行形态特征、理化特性检查及药敏试验、致病性试验和16S rRNA基因的分子鉴定。结果显示，从剖检病死毛皮动物的肺、肝、气管组织等均检出同种细菌，分离菌株对菌必治和舒巴坦高度敏感，对小白鼠具有较强致病作用，与已知的肺炎克雷伯氏菌的相应序列的同源性为98.6%-100%。综合分析，该分离菌株为克雷伯氏菌属的肺炎克雷伯氏菌。2.不同动物种源肺炎克雷伯氏菌分离株23S rRNA序列分析通过PCR扩增4株貂源、2株狐源、2株貉源、2株猪源和2株鸡源肺炎克雷伯氏菌的23S rRNA基因片段（727bp），经克隆测序，利用BLAST工具进行同源性搜索；用DNAStar分析软件进行同源核苷酸序列的多重比较分析并构建肺炎克雷伯氏菌菌株的系统生物进化树。结果显示，本实验室保存的12株肺炎克雷伯氏菌核苷酸序列与GenBank中收录的X87284株肺炎克雷伯氏菌核苷酸序列同源性为96.8%-99.0%，而与沙门氏菌和奇异变形杆菌同源性只有90.0%-92.7%；8株毛皮动物肺炎克雷伯氏菌核苷酸序列同源性为98.1%-99.9%，与猪源肺炎克雷伯氏菌核苷酸序列同源性为95.5%-98.1%，与鸡源肺炎克雷伯氏菌的核苷酸序列同源性为96.7%-97.9%；猪源与鸡源肺炎克雷伯氏菌的核苷酸序列同源性为95.9%-97.4%。结果表明，不同种源肺炎克雷伯氏菌23S rRNA基因序列同源性差异明显，具有种属的特异性，23S rRNA基因序列可以作为鉴定肺炎克雷伯氏菌的一种快速、简便的方法。3.肺炎克雷伯氏菌微胶囊口服疫苗的制备及其免疫效果检测为探索肺炎克雷伯氏菌微胶囊疫苗的免疫效果，本研究通过喷雾-界面配位改良法制备了肺炎克雷伯氏菌微胶囊疫苗，取清洁级昆明小鼠（雌性）200只，随机分为5组：I为松花粉多糖胶微胶囊疫苗组， II为蜂胶微胶囊疫苗组，III全菌体微胶囊疫苗组，IV为全菌体疫苗组和V为空白对照组，将其口服免疫小白鼠后，ELISA方法检测小肠中SIgA、血清中IgG抗体和IL-2水平，MTT法检测外周血淋巴细胞增殖率，流式细胞仪检测外周血中CD4~+、CD8~+T细胞亚群。结果显示，本研究制备的肺炎克雷伯氏菌微胶囊疫苗平均直径为6.980μm；且肠溶性良好，能避免胃酸的破坏；I组各项免疫指标显著高于其它组。研究表明，制备的肺炎克雷伯氏菌微胶囊疫苗能有效激活细胞免疫、体液免疫和局部黏膜免疫，可刺激机体产生大量的SIgA和IgG，并且使用方便，安全有效。