黄芪为常用大宗药材,来源于豆科植物蒙古黄芪Astragalus membrancrceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao 或膜荚黄芪 Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根,味甘、性温,归肺、脾经,具有益气固表、利尿消肿、托毒生肌之功效,是常用的补益中药之一。蜜炙是黄芪的主要炮制方法,临床上普遍采用的是蜜炙品和生品。现代药理实验研究证明蜜炙黄芪可提高小鼠非特异性免疫和巨噬细胞吞噬能力,且补气作用高于生品。目前对黄芪炮制品的研究报道很多,但尚存在评价指标单一、机理不明确、结论不统一等问题,此外,蜜炙中蜂蜜拌入的作用没有得到科学论证。因此,本课题采用蜂蜜类似物炮制黄芪,制备了蜜炙黄芪模拟组,用于揭示蜂蜜在蜜炙过程中的起作用的成分,·设立了蜜炙组、蜜炙模拟组、清炒组和生品组,从大类化学成分群比较、代谢组学分组、公认的活性成分含量比较、生物活性比较以及增白动物模型等不同角度出发,比较了黄芪及其炮制品的质量变化,初步探讨了蜜炙对黄芪化学物质基础的影响;同时设立了验证试验,验证蜂蜜对黄芪从蜜炙到提取过程中可能扮演的作用,期望为揭示黄芪蜜炙的机理提供参考。主要研究内容如下:1.采用安全、质量可控、成分简单的常用药用辅料制备的蜂蜜类似物替代传统蜂蜜进行蜜炙,与传统蜜炙品比较了水溶性浸出物、总多糖、总蛋白、总黄酮的含量和细胞活性。结果显示蜂蜜和蜂蜜类似物有相似性,蜜炙过程中,蜂蜜里的糖类成分起主要作用。2.利用HPLC/Q-TOF-MS技术,比较分析了不同炮制品的化学轮廓和主要成分含量。化学指纹比对结果显示不同的炮制方法对化学成分的种类影响不大,但对化学成分的含量影响较大;代谢组学分组结果显示蜂蜜类似物炮制黄芪和蜜炙黄芪为一组,生品、清炒品分为两组,表明蜂蜜的加入会影响黄芪炮制过程中化学轮廓的变化,而且蜂蜜类似物具有和蜂蜜相似的作用;半定量分析结果表明清炒黄芪中苷的乙酰化产物含量明显升高,而蜜炙黄芪中苷元含量降低,苷的含量升高。研究结果提示:清炒黄芪可能由于高温作用,导致苷的乙酰化产物增多;蜜炙黄芪中,蜂蜜可能对苷的乙酰化具有抑制作用。3.利用HPLC-DAD-ELSD分析技术,比较了黄芪及其不同炮制品中化学成分的含量。结果显示不同炮制方法对炮制品中化学成分的含量具有不同的影响,清炒黄芪的水提液中,苷的成分含量基本不变,而蜜炙品中苷的含量增加;清炒品苷元成分的含量明显降低,蜜炙品苷元含量也下降。表明加热可能会导致苷元成分的转化,而蜂蜜的加入有利于苷类成分的增高,蜂蜜在黄芪炮制中发挥了重要作用。4.验证试验从提取率、稳定性和化学转化三方面进行了考察,研究了蜂蜜对总黄酮和总皂苷提取率、饮片热稳定性、药材水提液热稳定性,以及对皂苷单体热稳定性的影响。结果显示蜂蜜可能具有促进化学成分溶出、保护化学成分在药材和水溶液中的稳定性、促进化学成分转化等作用。5.采用环磷酰胺所致小鼠白细胞减少模型,以白细胞、红细胞、免疫器官、体重等为考查指标,对比研究了生品和蜜炙品的干预作用。结果表明黄芪对环磷酰胺所致的白细胞减少和免疫器官萎缩有拮抗作用,能增加红细胞的数量和升高血红蛋白的浓度,改善小鼠的免疫能力,且蜜炙品的效果优于生品。