目的：研究细胞印片法是否适用于原子力显微镜(Atomic Force Microscope，AFM)观察人体瘤与非瘤淋巴细胞。首次应用AFM观察人体非肿瘤性淋巴结(正常淋巴结和反应性增生淋巴结)内的B淋巴细胞、T淋巴细胞与弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma DLBCL)内的瘤细胞、T淋巴细胞膜表面结构，研究这些细胞膜表面的结构和膜生物物理特性的变化对其活化及功能活性的调节作用，有利于阐明免疫功能改变的机制。通过比较不同性质的淋巴细胞膜表面结构，及其膜表面特征几何参数，为淋巴瘤的快速诊断提供有利证据，同时拓展单细胞的研究手段。应用AFM及超薄石蜡切片法在亚细胞水平上观察弥漫性大B细胞淋巴瘤，为进一步用分子生物学手段在亚细胞基因水平研究人淋巴瘤的病理学奠定了基础。 方法：本实验通过细胞印片法将非肿瘤性的淋巴结及淋巴瘤制成细胞印片，利用光学显微镜结合HE染色及免疫组化标记对其细胞组成进行计数分组，计算各细胞组成所占比例，分析各细胞在AFM镜下鉴别的难易程度。利用AFM分别观察非肿瘤性淋巴结内的B淋巴细胞、T淋巴细胞与DLBCL内的瘤细胞、T淋巴细胞膜表面结构，并利用AFM附带软件的线分析及面分析功能，得到其细胞膜表面结构的高低差Rp_v、均方根粗糙度Rrms、平均粗糙度Ra、平均高度Z四个几何参数值，采用统计学方法检验上述指标在三种组织中表达的差异。统计学方法采用方差分析检验，以P＜0.01具有统计学意义。将DLBCL制成超薄石蜡切片，经脱蜡处理后AFM镜下观察细胞内部结构。 结果：非肿瘤性淋巴结的细胞印片在直径小于10um的细胞中80-90％为淋巴细胞，在直径大于10um的细胞中85-95％为中心母细胞、中心细胞及巨噬细胞，各组成细胞可通过免疫组化标记镜下区分。淋巴瘤因肿瘤的性质不同其细胞印片中肿瘤细胞所占的比例亦不同，其中淋巴母细胞淋巴瘤细胞印片中肿瘤细胞所占比例最大，其值为60％，DLBCL的肿瘤细胞所占比例为50％，间变性大细胞淋巴瘤肿瘤细胞为20％。 通过扫描非肿瘤性淋巴结内的B淋巴细胞、T淋巴细胞、与DLBCL内的瘤细胞、T淋巴细胞膜表面结构，我们发现细胞膜表面密集有颗粒状突起物以及大量的孔洞，运用软件的线分析功能，可得知非肿瘤性淋巴结内的B淋巴细胞膜表面颗粒较DLBCL内的瘤细胞膜表面颗粒小，而且堆积较为紧凑。利用AFM软件的线分析及面分析功能，得到非肿瘤性淋巴结内的B淋巴细胞、T淋巴细胞与DLBCL的瘤细胞、T淋巴细胞膜表面结构的几何参数，经比较，DLBCL的瘤细胞高低差Rp_v、均方根粗糙度Rrms、平均粗糙度Ra、平均高度Z四个几何参数值均显著大于非肿瘤性淋巴结内的B淋巴细胞，DLBCL与非肿瘤性淋巴结内的T淋巴细胞的四个几何参数值无显著差异。 DLBCL制成超薄切片AFM镜下观察，DLBCL内细胞大小不一，形态多样，核区明显比胞浆区亮。瘤细胞的核增大，畸形，核膜内陷，核膜厚度约56nm。 结论：细胞印片易获得淋巴细胞标本，DLBCL的肿瘤细胞易得，镜下易识别，最适于制作AFM标本。 通过AFM观察到的细胞膜表面密集的突起物的形态和功能与细胞膜表面的各种受体、酶活性和通透性等性状相关。此外，我们还观察到细胞膜表面存在大量大小不一的小孔洞，利用传统的方法是很难观察到这种小孔洞。利用AFM分析软件对孔洞深部的细微结构进行形态学研究，对于揭示其生理功能将具有重大意义。DLBCL的瘤细胞四个几何参数值均显著大于非肿瘤性淋巴结内的B淋巴细胞，说明细胞膜生化组成、物质性状和形态改变与肿瘤发生相关，DLBCL与非肿瘤性淋巴结内的T淋巴细胞的四个几何参数值无显著差异，说明DLBCL组织内的T淋巴细胞呈反应性增生改变。本实验首次运用AFM观察人体瘤与非瘤淋巴细胞，通过比较不同性质的淋巴细胞膜表面结构，及其膜表面特征几何参数，为临床淋巴瘤的快速诊断和预后提供重要参考，同时也拓展了单细胞的研究手段。 此外，通过超薄石蜡切片、分区域扫描和计算机软件分析等技术，本研究初步解决了AFM在人体淋巴瘤应用中的两大难题一样品内部结构的不可获得性和样品扫描范围的限制性。