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能量代谢异常是肿瘤细胞的基本特征,在肿瘤发生与演进中发挥了关键作用。糖代谢重编程是肿瘤细胞能量代谢失调的主要方面,在生物合成与氧化还原反应中提供能量和物质前体,但肿瘤细胞这种低效供能方式的分子机制尚不明确。既往研究表明,CD147通过p53途径促进人肝癌细胞糖酵解与增殖。p53失活是人类恶性肿瘤细胞中的普遍现象,约60%的卵巢癌患者存在p53突变。然而,CD147能否通过非依赖p53途径促进卵巢癌细胞糖代谢重编程及其具体的分子机制尚不明确。本课题在既往研究基础上,借助p53缺失型卵巢癌细胞系,深入研究CD147参与卵巢癌细胞糖代谢重编程的生物学作用,系统分析CD147通过非依赖p53途径促进卵巢癌细胞有氧糖酵解的分子网络调控机制。这些研究可进一步加深对卵巢癌能量代谢异常的理解,也为CD147作为卵巢癌治疗靶点提供更为丰富的分子理论基础。本研究主要分为以下三个部分第一部分:CD147通过非依赖p53途径促进卵巢癌细胞糖酵解的作用研究为阐明CD147在卵巢癌细胞糖代谢过程中的作用,我们构建了稳定干涉CD147的卵巢癌细胞系。我们发现无论是在p53野生型的A2780细胞中,还是在p53缺失型的SKOV3细胞中,干涉CD147的表达均会降低细胞糖摄取、糖酵解速率和乳酸排出,而氧消耗则有所升高。小动物PET/CT成像系统显示干涉CD147的表达会显著降低裸鼠移植瘤的18F-FDG摄取能力,且移植瘤的细胞增殖速度有所降低。总之,我们的实验结果表明CD147具有促进卵巢癌细胞糖酵解的作用,并有可能成为基于能量代谢失调的靶点,从而制定新的抗肿瘤策略。第二部分:CD147在卵巢癌细胞中调控FOXM1的机制研究为明确CD147促进卵巢癌细胞糖酵解的分子机制,我们使用shRNA技术在卵巢癌细胞A2780和SKOV3中干涉了CD147的表达。Western blot结果显示,在卵巢癌细胞A2780和SKOV3中下调CD147会明显降低CD147,pAKT、pSTAT3和FOXM1的表达。Real time PCR结果显示,在卵巢癌细胞A2780和SKOV3中下调CD147会明显降低FOXM1 mRNA的表达水平。另一方面,AKT抑制剂LY294002和STAT3抑制剂S3I-201在卵巢癌细胞中会显著降低过表达CD147对FOXM1的上调作用。激光共聚焦成像结果显示,CD147和CD44在卵巢癌细胞中共定位。通过免疫组织化学染色检测,我们发现CD147、pAKT、pSTAT3和FOXM1在卵巢癌组织中共表达。第三部分:转录因子FOXM1促进卵巢癌细胞糖代谢重编程的机制研究我们首先筛选了转录因子FOXM1可能调控的糖酵解关键酶,在卵巢癌细胞中干涉FOXM1的表达后,发现GLUT1和HK2的表达水平也随之下降,且细胞糖酵解和增殖明显受到抑制。进一步研究发现,GLUT1和HK2的DNA启动子序列存在转录因子FOXM1的结合位点,FOXM1能在卵巢癌细胞中激活GLUT1和HK2的转录与表达。我们还发现FOXM1、GLUT1和HK2在卵巢癌组织中的表达水平远高于正常卵巢组织,且FOXM1在卵巢癌组织中的表达分别与GLUT1和HK2的表达正相关。