【摘 要】
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本研究以秦川牛心肌为材料,采用酸化水提取,人造沸石吸附,硫酸铵盐析,三氯乙酸沉淀,透析及过滤后测定其细胞色素C含量。用D-85离子交换树脂在层析柱内纯化后,测定细胞色素C中
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本研究以秦川牛心肌为材料,采用酸化水提取,人造沸石吸附,硫酸铵盐析,三氯乙酸沉淀,透析及过滤后测定其细胞色素C含量。用D-85离子交换树脂在层析柱内纯化后,测定细胞色素C中含铁量、酶活力,并用电泳鉴定其纯度。利用提取细胞色素C后的牛心肌渣,采用醇碱皂化、石油醚萃取,浓缩后低温放置除去胆固醇等杂质,上硅胶柱,收集黄色油状物,无水乙醇结晶后得到精品CoQ10。用薄层层析,对照Rf值进行定性鉴定,用紫外分光光度计在275nm下测定其纯度。对提取纯化产品进行分析,取得了以下主要结果:(1)研究分析表明,提取纯化细胞色素C工艺合理,样品定性鉴别正常,电泳分析为一条谱带。样品与标准品在紫外分光光度上扫描,紫外吸收光谱相同,在520nm和550nm处有最大吸收峰。(2)细胞色素C样品经比色定量测定平均收率为146.3mg/kg,高于国内文献报导。纯化后样品铁含量平均为0.42%,酶活力平均为96.2%,符合中国药典规定。(3)从牛心肌渣中制备CoQ10,经研究醇碱皂化适宜温度为90℃,皂化时间为30min,萃取2次。经薄层层析,仅有一个斑点,Rf=0.56(a=7.5cm, c=13.5cm)。样品与标准CoQ10在紫外光度计扫描,紫外吸收光谱相同,在275nm处有最大吸收峰,定量测定样品的纯度为91.2%。(4)根据牛心肌生理特征,采用较常规方法低的pH3.4酸化水,有利于提取细胞色素C。用国产D-85大孔弱酸性阳离子交换树脂替代常用的美国Amberlite IRC-50交换树脂纯化细胞色素C,效果更好。(5)本研究采用多项生化技术组合,先从牛心肌中提取纯化细胞色素C,再从心肌渣中萃取CoQ10。为资源综合开发利用提供工艺,符合目前节约型社会要求。
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