近年来，排放到环境中的药物及其潜在的影响引起了越来越多的科学家的关注。抗生素抗性基因(Antibiotic resistance genes，ARGs)导致的对抗生素有抗性的病原体的传播是本世纪对人类健康生活最严重的威胁之一。ARGs在环境中的持久性残留，以及在不同环境介质中的迁移、转化往往比抗生素本身的环境危害更大。抗生素的大量使用，使水环境不仅成为耐药基因的储库，也成为耐药基因扩展和演化的媒介，因此需要特别加强水环境中抗生素抗性基因的环境行为研究。目前国内对于ARGs的危害性还未给予应有的重视，有关ARGs的研究大多集中于临床微生物中抗性基因的定性分析方面，很少见到环境介质中ARGs定性及定量分析的报道。有鉴于此，加强环境中抗生素抗性基因污染及传递机制等方面的研究，从而寻找有效措施阻止ARGs的产生及其在环境中的广泛传播是一项十分紧迫的任务。 本论文的目的是建立环境中抗生素耐药性检测及抗生素抗性基因(ARGs)的存在和含量水平分析的方法，初步调查珠三角水环境中细菌耐药性现状及ARGs的存在和含量水平。主要研究内容包括：1)使用抗生素抗性培养基筛选的方法调查北江水域四环素、红霉素及磺胺类抗生素耐药性细菌的存在；2)使用聚合酶链反应(PCR)以及基因测序的方法来探测几种四环素、红霉素及磺胺类ARGs的存在；同时，3)采用荧光定量PCR对sull和sul2这两种磺胺类抗性基因进行进一步定量分析，以获得其污染水平。 本研究选取了具有代表性的9个采样点来调查珠三角水环境中细菌耐药性现状及抗性基因的存在和含量水平。具体研究结果如下： 1.采用抗生素抗性培养基筛选法，研究了珠三角水环境中细菌对四环素、红霉素及磺胺类抗生素的耐药性情况。抗性培养基的终浓度分别为，四环素，50mg/L；红霉素，18 mg/L；磺胺二甲嘧啶，280 mg/L。在所研究的9个水样中，8个水样对磺胺二甲嘧啶有耐药性，5个水样对四环素有耐药性，7个水样对红霉素有耐药性；而所有对照实验结果均为阴性。这些实验结果表明，该方法可用于水环境中细菌耐药性检测，所获得的样品耐药性结果表明该研究水域细菌耐药性情况比较严重。 2.使用聚合酶链反应(PCR)方法深入研究了几种四环素、红霉素及磺胺类等三类不同类别抗生素抗性基因的存在。经定性PCR实验证实其中5个样品含有磺胺类抗性基因sull，4个样品含有磺胺类抗性基因sul2。 3.对PCR产物进行基因测序，以进一步确定是否为目的基因。基因测序结果进一步证实4个样品含有sull目的基因，2个样品含有sul2目的基因。所有基因测序均通过正反链测序证实，测序结果与目的基因的匹配度在98～100％范围内，同时，作为荧光定量PCR内参的16S-rRNA基因亦经克隆测序证实。故可以十分肯定地表明水样中存在磺胺类抗性基因的污染。 4.国内首次采用荧光定量PCR方法对sul1和sul2两种磺胺类抗性基因进行了定量分析，获得了北江一些水样ARGs的污染水平。定量PCR结果显示，7个样品中sul1和sul2均有检出。sul1与16S-rRNA表达量的比值在0.002729～0.305484范围内，sul2与16S-rRNA表达量的比值在0.00056～0.057602范围内。实验结果显著高于美国科罗拉多州北部河流的检测结果，说明所研究的北江水域受磺胺类抗性基因sul1和sul2污染较严重。实验结果还表明，ARGs的含量水平与人类活动及区域抗生素含量分布具有一定的相关性。