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目的:研究miR-29c在胰腺癌侵袭转移中的作用方法:1.RT-PCR检测5株不同分化能力胰腺癌细胞株(PANC-1,Bx Pc-3,Hs766t,cFPAN,Capan1)的miR-29s的表达,Western Blot及明胶酶谱法检测5株不同分化能力胰腺癌细胞MMP2的表达和活性,利用Spearman等级相关统计方法分析在胰腺癌细胞中miR-29s表达与MMP2表达的相关性。2.通过转染miRNA mimic和miRNA inhibitor分别构建mi R-29c的过表达和干扰表达;CCK-8检测mi R-29c表达对胰腺癌细胞增殖能力影响;Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验分别检测mi R-29c表达对胰腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。3.结合生物信息学预测和荧光素酶活性报告基因证实mi R-29c调控MMP2表达的分子机制。4.通过裸鼠原位胰腺癌种植模型筛选出自发性高肝转移胰腺癌细胞亚群(Hs766t、Hs766t-L1和Hs766t-L2),分别检测mi R-29c和MMP2的表达,分析其表达与转移能力的相关性;利用所获得高肝转移胰腺癌细胞活体验证mi R-29s对胰腺癌转移能力的影响。5.RT-PCR检测胰腺癌组织及其癌旁组织mi R-29c的表达,免疫组化检测胰腺癌组织及其癌旁组织MMP2蛋白表达,分别分析其表达与临床病理参数相关性;Kaplan–Meier统计方法分析mi R-29c表达对胰腺癌预后的影响。结果:1.在胰腺癌细胞中,mi R-29c表达与MMP2蛋白表达呈负相关。2.过表达miR-29c对胰腺癌细胞的增殖能力无影响,但可明显抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力;干扰mi R-29c表达后可显著增强胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力。3.生物信息学预测提示:MMP2 3’UTR存在一个mi R-29c结合位点;过表达mi R-29c*2011年国家自然科学基金面上项目(81071975)可显著降低MMP2 mRNA和蛋白表达水平,干扰miR-29c表达后可显著上调MMP2mRNA和蛋白表达水平;miR-29c可显著抑制野生型报告基因荧光素酶活性,而对突变型报告基因荧光素酶活性无影响。4.通过裸鼠原位胰腺癌种植模型,体外分离并培养出自发性高肝转移胰腺癌细胞亚群(Hs766t、Hs766t-L1和Hs766t-L2),mi R-29c表达与胰腺癌细胞转移潜能呈负相关,而MMP2蛋白表达与胰腺癌细胞的转移潜能呈正相关;利用高转移潜能胰腺癌细胞Hs766t-L2构建裸鼠原位胰腺癌动物模型,过表达miR-29c明显抑制裸鼠原位胰腺癌自发性肝转移。5.在胰腺癌临床样本中,miR-29c的表达明显低于其对应的癌旁组织,且与MMP2蛋白的表达呈负相关;miR-29c的表达与胰腺癌的分化程度、淋巴结转移和TNM期相关;同时miR-29c的表达是影响胰腺癌预后的独立因素。结论:1.在细胞水平和活体水平证实mi R-29c通过靶向调控MMP2表达抑制胰腺癌侵袭转移。2.mi R-29c调控MMP2是调控胰腺癌转移的一个重要机制,但存在其它机制调控胰腺癌侵袭转移;在胰腺癌肝转移过程中,miR-29c是调控MMP2的一个重要因素,但并不是唯一的。3.mi R-29c靶向调控MMP2表达为望为胰腺癌肝转移的诊断和治疗提供理论基础。