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目的 体外扩增弓形虫RH株信号转导蛋白14-3-3（Toxo14-3-3）和膜表面主要抗原SAG1编码基因，克隆至原核表达载体pET28a，并表达出Toxo14-3-3和SAG1重组蛋白。利用此重组蛋白，探讨rToxo14-3-3和rSAG1用于诊断弓形虫感染的价值。方法收集、纯化弓形虫RH株速殖子，提取总RNA，逆转录生成cDNA，然后以其为模板扩增出Toxo14-3-3、SAG1编码基因，将扩增产物克隆入原核表达载体pET28a。在原核细胞表达Toxo14-3-3、SAG1重组蛋白。重组子双酶切、PCR和测序鉴定，转化大肠杆菌BL21．并以IPTG诱导表达。制备、纯化rToxo-14-3-3和rSAG1蛋白抗原，利用纯化的rToxo-14-3-3和rSAG1抗原，间接ELISA法探讨其诊断弓形虫病的价值。结果RT-PCR扩增出一具有803bp完整开放读码框的Toxo-14-3-3的cDNA片段和1011bp完整开放读码框的SAG1的cDNA片段，成功地将其克隆入pET28a；将pET28a／Toxo14-3-3和pET28a／SAGl分别做EcoRI、Xho Ⅰ和EcoRI、Hind Ⅲ双酶切，分别获得了一个大小与其相应PCR扩增产物一致的插入片段；用IPTG诱导重组质粒转化的大肠杆菌BL21（DE3），分别得到了30.7kDa和34.6kDa的重组蛋白；rToxo-14-3-3的融合蛋白可被弓形虫速殖子感染的兔血清、弓形虫缓殖子感染的鼠血清、抗14-3-3epsilon多克隆抗体、弓形虫感染阳性病人血清识别；rSAG1的融合蛋白可被弓形虫速殖子感染的兔血清识别。间接ELISA和Western-blot结果显示，rToxo-14-3-3作为抗原检测急、慢性弓形虫感染可获得很高的敏感性和特异性，具有实用价值。结论成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了14．3．3基因和SAGl基因，构建了pET28a／Tox014—3．3和pET28a／SAGl重组质粒，并获得了高效表达，间接ELISA及Western-blot表明，rToxo．14．3．3在急慢性弓形虫感染诊断中具有实用价值。本研究为弓形虫病的免疫学诊断和蛋白质疫苗的研究创造了条件。