背景：肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，全球每年新发病例161万，致死率在各种癌症中居于首位。实现癌症的早期诊断及有效治疗成为提高患者存活率的关键，高特异性及灵敏度的肿瘤标志物在癌症诊治中发挥重要作用。高质量肺癌T7噬菌体cDNA文库的构建为特异性肿瘤标志物的筛选打下基础。目前常用的噬菌体展示系统大都采用C端展示，以此构建的cDNA文库缺乏开放阅读框筛选机制，文库中多数噬菌体克隆展示框外非天然短肽，给后期蛋白质的筛选带来了不便。构建可直接筛选文库中ORF的载体显得尤为重要。方法：利用PCR技术向已有的T7Select10-3b载体多克隆位点的3’端插入可用于文库ORF筛选的六聚组氨酸标签。以空T7作对照，利用免疫印迹法对新型噬菌体进行组氨酸表达鉴定。选取成功表达6×His标签的噬菌体用于肺癌cDNA文库的构建。提取肺癌组织总RNA，对分离到的mRNA进行cDNA双链的合成，经末端修饰后进行cDNA片段分离，收集300bp以上的片段连入改造的T7载体中，经体外包装得到肺癌cDNA文库。对文库进行镍柱亲和层析筛选，只有插入的外源cDNA为ORF且不发生阅读框移码时，其3’端的His标签才能正常表达。通过收集可表达组氨酸的克隆，从而获得含有ORF插入的重组噬菌体，利用化学发光免疫试验进行筛选效果鉴定。结果：构测序显示，6×His标签正确插入到T7噬菌体基因组的Hind III和Xho I酶切位点间。免疫印迹实验表明改造的新型载体可成功表达6×His标签并发出荧光，而对照组无荧光信号。以新载体构建的肺癌cDNA文库库容为1.6×10~6pfu，从原始文库中随机挑取100个噬菌斑进行PCR鉴定显示重组率大于85%，重组体中90%的cDNA插入长度大于300bp。经Ni2+亲和筛选后，文库中含ORF插入的克隆由筛前的6%提高至70%。结论：成功构建了可表达6×His筛选标签的新型T7噬菌体。并以此构建了较高质量的肺癌T7噬菌体cDNA文库。经标签亲和筛选后，有效实现了文库ORF的富集，为提高cDNA文库的质量提供了一种简便可行的方法。