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目的:本研究拟检测TLR4在胶质瘤细胞中的表达,探讨TLR4对胶质瘤细胞生物学活性的影响。方法:1采用RT-PCR方法检测胶质瘤细胞株U251-MG中TLR4的m RNA表达情况。2采用Western Blot方法检测U251-MG细胞中TLR4的蛋白表达情况。3构建TLR4 si RNA重组质粒,转染至U251-MG细胞。采用RT-PCR方法检测基因转染后U251-MG细胞中TLR4的m RNA表达情况。4采用Western Blot方法检测基因转染后U251-MG细胞中TLR4的蛋白表达情况。5采用流式细胞分析技术检测TLR4基因沉默前后对胶质瘤细胞周期的影响。6采用MTT实验检测TLR4基因沉默前后胶质瘤细胞的增殖活性。7采用ELISA法检测TLR4基因表达沉默前后胶质瘤细胞培养上清中IL-6、IL-10和VEGF含量变化。结果:1 RT-PCR实验结果显示,在胶质瘤细胞U251-MG中可检测到TLR4m RNA表达。2 Western Blot实验结果显示,在胶质瘤细胞U251-MG中可检测到TLR4蛋白表达。3将TLR4 si RNA重组质粒转染U251-MG细胞后,检测TLR4的m RNA表达情况,结果显示,转染TLR4 si RNA质粒24h后,U251-MG细胞中TLR4 m RNA表达水平(0.138±0.0004)比转染空载体组(1.003±0.0005)、未转染组(1.034±0.0006)显著降低(P<0.01)。转染空载体组与未转染组之间差异无统计学意义。4将TLR4 si RNA重组质粒转染U251-MG细胞后,检测TLR4的蛋白表达情况,结果显示,与转染空载体组(0.900±0.0062)、未转染组(1.007±0.0029)相比,转染TLR4 si RNA基因24h后,U251-MG细胞中TLR4蛋白表达水平(0.200±0.0042)显著降低(P<0.05)。转染空载体组与未转染组之间差异无统计学意义。5流式细胞分析结果显示,未转染、转染空载体和转染TLR4 si RNA的U251-MG细胞,经10μg/ml LPS作用48h,与未经LPS作用时相比,三组细胞S期细胞比例均明显增高,G0/G1期细胞比例下降(P<0.05);在LPS刺激情况下,转染TLR4 si RNA组细胞与未转染组和转染空载体组细胞相比,S期细胞比例显著降低,G0/G1期细胞比例增高(P<0.05)。6 MTT实验结果显示,经10μg/ml LPS刺激后,与未转染组和转染空载体组相比,转染TLR4 si RNA组细胞增殖率显著降低(P<0.05)。7 ELISA实验结果显示,经10μg/ml LPS作用12h后,与未转染组和转染空载体组相比,转染TLR4 si RNA组U251-MG细胞分泌IL-6,IL-10,VEGF的含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胶质瘤细胞U251-MG表达TLR4,沉默TLR4基因表达可抑制LPS诱导的肿瘤细胞增殖和细胞因子分泌。