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慢性压力负荷的增高最突出的表现即高血压。长期的左室高压会引起心脏一系列的病理生理反应,最终将失代偿出现不可逆心衰,导致死亡。此外心脏瓣膜疾病及心律失常均会引起血流动力学的变化,从而导致射血系统压力增高。压力超负荷主要表现为心肌纤维化、细胞外基质增多并沉积,心肌顺应性及收舒功能下降等。其中心脏成纤维细胞的增殖、迁移、转化为成纤维母细胞合成细胞外基质是重要的病理生理过程。因此,如果能够抑制其增殖及化生,减少细胞外基质的大量合成,对心脏功能的转归有着重要的正面意义。BRCC36蛋白是新近被发现的由BRCC3基因编码,表现为可特异性去除Lys63位点泛素链的去泛素化酶,是JAB1/MPN/Mov34金属酶结构域(JAMM)类去泛素化酶家族的一个重要成员。通过我们的先前研究,BRCC36通过对促炎促纤维化TGF-β(转化生长因子β)信号通路中Smad3的去泛素化修饰,达到抑制该信号通路的激活,达到抗炎抗凋亡抗纤维化的正面作用。本课题的研究意义也再于从分子生物学层面,通过对TGF-β信号通路的研究,从Smad3调节的角度来阐明BRCC36对TGF-β1/Smad通路的新型负性调控机制,这些研究结果将为研发新的临床治疗策略提供新的思路和分子药物干预靶标。目的：观察BRCC36在心肌纤维化过程中,对TGF-β1通路胞内信号分子Smad3的影响和作用机制,探索在调节细胞内BRCC36表达水平后,对慢性压力负荷诱导的心肌纤维化形成的影响,为研发有效的抗心肌纤维化治疗策略提供新的思路和分子药物干预靶标。方法：使用体外培养的第2代心脏成纤维细胞(使用特异性针对α-SMA及Vimentin的抗体对其鉴定),利用构建好的BRCC36过表达腺病毒和BRCC36消减腺病毒,来感染心脏成纤维细胞,使其产生BRCC36表达的差异,分别记为BRCC36过表达组、消减表达组、空白对照组。分别同时给予细胞因子TGF-β1刺激,通过收集蛋白检测BRCC36的表达水平、smad3蛋白的磷酸化程度；通过免疫荧光检测BRCC36的细胞内分布及Smad3入核来阐述BRCC36调控心脏成纤维细胞内Smad3信号通路的机制及意义。结果：1、BRCC36过表达组在给予TGF-《1刺激后,smad3的磷酸化水平较空白对照组明显降低；相比之下,BRCC36消减组其smad3磷酸化水平较空白对照组无明显升高,提示BRCC36过表达可以明显抑制成纤维细胞内TGF-》1通路的激活,即表现为其细胞内smad3的磷酸化明显受到抑制,提示对成纤维细胞的纤维化有保护作用。2、通过对细胞内BRCC36、smad3蛋白进行免疫荧光染色,发现空白对照组在给予TGF-β1处理后1小时,细胞内smad3明显核内移,从全细胞散在分布状态转换为细胞核内聚集状态。提示该通路被激活。而BRCC36过表达组smad3核内移的程度明显低于空白对照组(P<0.01),BRCC36消减表达组未出现smad3入核受阻的现象,反而程度增加。表明心脏成纤维细胞内过表达BRCC36可以阻止TGF-β1信号通路的胞内信号分子smad3的入核,使其无法与效应靶基因位点结合,从而丧失其调控能力,抑制该信号通路的激活。从而达到抑制纤维化的作用。3、使用体外培养的心脏成纤维细胞,当给予TGF-β1刺激后,通过收集不同时间点(0、0.5、1、6、12、24小时)细胞内蛋白来检测BRCC36的表达水平表化。发现BRCC36在给予TGF-β1刺激后会发生诱导性升高,至12小时可达到最高值,升高约2.45倍(P<0.01),随后开始下降,提示BRCC36可能做为一种负反馈因素来反馈调节TGF通路的激活,使其受控,不会过度激活。结论：心脏成纤维细胞内过表达BRCC36蛋白,可抑制TGF-β1通路的激活。其机制是①、通过过表达BRCC36可起到扣压细胞质中smad3的作用。②、细胞内过表达BRCC36可抑制smad3的磷酸化,从而阻止smad3转换成为激活状态,抑制TGF-β1的细胞内信号传导。③、细胞内过表达BRCC36可抑制samd3的入核,阻止信号内传到细胞核,从而抑制靶基因活化转录。④、BRCC36可能做为一种负反馈调节因子,抑制TGF-β1信号通路过度激活。