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目的：明确钙粘蛋白S100A10在乳腺癌中的表达情况，以及S100A10与HER2/HER3之间的关系。探究S100A10对乳腺癌细胞曲妥珠单抗敏感性的影响及机制。
方法：利用RT-PCR和westernblot检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231中S100A10的表达量。在酵母双杂交实验中，分别构建诱饵质粒pGBKT7-HER3C(HER3胞内段)/pGBKT7-HER2C(HER2胞内段)和捕获质粒pGADT7-S100A10。分别将pGBKT7-HER3C和pGADT7-S100A10、pGBKT7-HER2C和pGADT7-S100A10共转入酵母细胞Y2HGold后涂布在相应的缺陷平板上来探究两者的作用关系。并通过构建原核表达载体pGEX-4T1-S100A10诱导GST-S100A10融合蛋白表达，行转染实验在293T细胞中过表达myc-HER3和myc-HER2蛋白，体外GSTpull-down实验进一步验证两者的相互作用关系。利用过表达S100A10慢病毒感染SK-BR-3、MCF-7细胞，构建稳定过表达S100A10的细胞株SK-BR-3OE、MCF-7OE和对照细胞株SK-BR-3NC、MCF-7NC，通过细胞增殖实验、克隆形成实验和流式细胞术检测S100A10对乳腺癌细胞增殖能力和细胞周期进程的影响。每组取3000个细胞培养于96孔板中，分别用0μg/ml、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL浓度的曲妥珠单抗处理72小时后，用CCK8法检测过表达组和对照组在450nm波长处的吸光值，计算出各组细胞IC50。流式细胞术检测经20μg/mL曲妥珠单抗作用48小时后各组细胞的凋亡水平，探究S100A10对乳腺癌细胞曲妥珠单抗敏感性的影响。提取细胞胞浆及胞膜蛋白行westernblot实验检测各组细胞中HER2、HER3、AnnexinA2在亚结构的含量变化，以及PI3K/AKT信号通路蛋白的表达水平,明确S100A10影响曲妥珠单抗敏感性的机制。
结果：S100A10在乳腺癌细胞中的表达量明显高于正常乳腺上皮细胞(p＜0.05)。酵母双杂交实验结果表明S100A10能与HER3C直接相互作用，而与HER2C不存在直接相互作用，并在GSTpull-down实验中验证了这一直接相互作用。过表达S100A10使乳腺癌细胞增殖能力和克隆形成能力明显增强(p＜0.05)，过表达组乳腺癌细胞G0/G1期细胞减少，G2/M期细胞增多，周期相关蛋白cyclinD1、cyclinE1含量明显增多(p＜0.05);曲妥珠单抗诱导72小时，SK-BR-3OE、SK-BR-3NC细胞的IC50值分别为17.11μg/mL和93.10μg/mL，MCF-7OE、MCF-7NC细胞的IC50值分别为73.95μg/mL和79.64μg/mL。流式细胞术细胞凋亡结果发现，与对照组相比，SK-BR-3OE细胞经曲妥珠单抗诱导后的凋亡水平明显降低(p＜0.05)，MCF-7OE和MCF-7NC细胞经曲妥珠单抗诱导后凋亡水平无明显变化；Westernblot结果显示，S100A10过表达组(SK-BR-3 OE)与对照组(SK-BR-3 NC)相比，胞浆HER2、HER3、AnnexinA2含量无明显变化；胞膜上HER2表达无明显改变，HER3、AnnexinA2表达明显增多；AKT总量无明显改变，p-AKT和PI3Kp85亚基含量增多。
结论：钙粘蛋白S100A10在乳腺癌细胞中高表达，S100A10与HER3C存在直接相互作用。过表达钙粘蛋白S100A10能增强乳腺癌细胞的增殖能力，调控细胞周期进程，增强乳腺癌细胞对曲妥珠单抗耐药性。影响曲妥珠单抗耐药性的机制可能是S100A10通过增加HER3的膜定位，激活下游PI3K/AKT信号通路。
方法：利用RT-PCR和westernblot检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞SK-BR-3、MCF-7、MDA-MB-231中S100A10的表达量。在酵母双杂交实验中，分别构建诱饵质粒pGBKT7-HER3C(HER3胞内段)/pGBKT7-HER2C(HER2胞内段)和捕获质粒pGADT7-S100A10。分别将pGBKT7-HER3C和pGADT7-S100A10、pGBKT7-HER2C和pGADT7-S100A10共转入酵母细胞Y2HGold后涂布在相应的缺陷平板上来探究两者的作用关系。并通过构建原核表达载体pGEX-4T1-S100A10诱导GST-S100A10融合蛋白表达，行转染实验在293T细胞中过表达myc-HER3和myc-HER2蛋白，体外GSTpull-down实验进一步验证两者的相互作用关系。利用过表达S100A10慢病毒感染SK-BR-3、MCF-7细胞，构建稳定过表达S100A10的细胞株SK-BR-3OE、MCF-7OE和对照细胞株SK-BR-3NC、MCF-7NC，通过细胞增殖实验、克隆形成实验和流式细胞术检测S100A10对乳腺癌细胞增殖能力和细胞周期进程的影响。每组取3000个细胞培养于96孔板中，分别用0μg/ml、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL浓度的曲妥珠单抗处理72小时后，用CCK8法检测过表达组和对照组在450nm波长处的吸光值，计算出各组细胞IC50。流式细胞术检测经20μg/mL曲妥珠单抗作用48小时后各组细胞的凋亡水平，探究S100A10对乳腺癌细胞曲妥珠单抗敏感性的影响。提取细胞胞浆及胞膜蛋白行westernblot实验检测各组细胞中HER2、HER3、AnnexinA2在亚结构的含量变化，以及PI3K/AKT信号通路蛋白的表达水平,明确S100A10影响曲妥珠单抗敏感性的机制。
结果：S100A10在乳腺癌细胞中的表达量明显高于正常乳腺上皮细胞(p＜0.05)。酵母双杂交实验结果表明S100A10能与HER3C直接相互作用，而与HER2C不存在直接相互作用，并在GSTpull-down实验中验证了这一直接相互作用。过表达S100A10使乳腺癌细胞增殖能力和克隆形成能力明显增强(p＜0.05)，过表达组乳腺癌细胞G0/G1期细胞减少，G2/M期细胞增多，周期相关蛋白cyclinD1、cyclinE1含量明显增多(p＜0.05);曲妥珠单抗诱导72小时，SK-BR-3OE、SK-BR-3NC细胞的IC50值分别为17.11μg/mL和93.10μg/mL，MCF-7OE、MCF-7NC细胞的IC50值分别为73.95μg/mL和79.64μg/mL。流式细胞术细胞凋亡结果发现，与对照组相比，SK-BR-3OE细胞经曲妥珠单抗诱导后的凋亡水平明显降低(p＜0.05)，MCF-7OE和MCF-7NC细胞经曲妥珠单抗诱导后凋亡水平无明显变化；Westernblot结果显示，S100A10过表达组(SK-BR-3 OE)与对照组(SK-BR-3 NC)相比，胞浆HER2、HER3、AnnexinA2含量无明显变化；胞膜上HER2表达无明显改变，HER3、AnnexinA2表达明显增多；AKT总量无明显改变，p-AKT和PI3Kp85亚基含量增多。
结论：钙粘蛋白S100A10在乳腺癌细胞中高表达，S100A10与HER3C存在直接相互作用。过表达钙粘蛋白S100A10能增强乳腺癌细胞的增殖能力，调控细胞周期进程，增强乳腺癌细胞对曲妥珠单抗耐药性。影响曲妥珠单抗耐药性的机制可能是S100A10通过增加HER3的膜定位，激活下游PI3K/AKT信号通路。