论文部分内容阅读
目的:肾细胞癌(RCC)的发病率居我国泌尿系恶性肿瘤的第二位,仅次于膀胱癌,大约占成人全部恶性肿瘤的2%-3%,其中最常见的病理类型为肾透明细胞癌(RCCC)。肾细胞癌侵袭力较强,20%的患者初诊时已发生转移,30%的患者术后发生转移。肾细胞癌的患者对放化疗均不敏感。干扰素和白细胞介素-2联合应用的传统免疫疗法亦不能显著提高中、晚期患者的生存率。随着近些年对肾细胞癌侵袭机制研究的深入,分子靶向治疗已成为肾细胞癌的有效治疗手段。有研究表明,ANXA2和t-PA在多种肿瘤的发生、发展和浸润转移的过程中起重要作用,但有关联合检测二者在肾透明细胞癌中的表达情况的研究,至今尚未有所报道。膜联蛋白A2(ANXA2)是一类钙依赖性,并能够与膜磷脂结合的蛋白质分子,在细胞骨架的稳定、吞噬和吞饮、DNA合成、细胞增殖等方面起着重要调节作用。ANXA2的异常表达及分布变化与许多疾病有关,如自身免疫性疾病、糖尿病、炎症及多种肿瘤的发生。t-PA是一种与纤维蛋白高度亲和的丝氨酸蛋白酶,其位于羧基末端的丝氨酸蛋白酶结构域能够切断纤溶酶原氨基末端的肽键,从而激活纤溶酶原转变为有活性的纤溶酶。ANXA2和t-PA可在内皮细胞表面共区域化,降解细胞外基质、破坏细胞间的黏附结构、促进血管生成,进而提高肿瘤细胞的侵袭能力。本实验通过检测ANXA2和t-PA在肾透明细胞癌组织及对照组织中的表达情况,分析二者与患者性别和年龄及病理分期、临床分期的关系,为肾透明细胞癌患者早期诊断、临床治疗、预后评估等提供新的思路。方法:1选取2014年7月至2015年9月河北医科大学第二医院泌尿外科术后的肾透明细胞癌标本45例(经病理学证实为肾透明细胞癌),其中男25例,女20例;年龄46-75岁。同时选取30例癌旁组织(远离癌组织4cm以上,经病理学证实均为正常肾组织)。依据Fuhrman分级标准:高分化11例,中分化15例,低分化19例;依据2010年美国抗癌协会(AJCC)肾癌TNM分期标准:Ⅰ期10例、Ⅱ期12例、Ⅲ期10例和Ⅳ期13例。所有患者术前均未行放、化疗、免疫治疗等治疗。将所有标本分为两部分,一部分经甲醛溶液固定,石蜡包埋、切片;另一部分置于-80℃冰箱中保存。2应用免疫组织化学法及RT-PCR的方法检测肾透明细胞癌组织和癌旁正常组织中ANXA2和t-PA的表达情况,其中RT-PCR的检测结果采用积分吸光度比值表示。3应用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,采用?2检验或Fisher确切概率法对肾透明细胞癌组织和癌旁正常组织中ANXA2和t-PA的表达率进行检验,并分析二者与患者的性别、年龄、病理分级及临床分期的关系;采用Spearman相关性分析对ANXA2和t-PA在肾透明细胞癌组织标本中表达的相关性进行分析;应用t检验对ANXA2和t-PA的m RNA积分吸光度值进行组间比较。P<0.05差异有统计学意义。结果:1免疫组织化学结果显示:ANXA2的阳性表达主要分布在胞膜、胞浆,少数分布在胞核。ANXA2在肾透明细胞癌组织标本中的阳性表达率为77.8%(35/45),明显高于癌旁正常组织中的53.3%(16/30)(P<0.05)。t-PA的阳性表达也主要分布于胞膜和胞浆中,t-PA在肾透明细胞癌组织标本中的阳性表达率为73.3%(33/45),高于癌旁正常肾组织中的50.0%(15/30)(P<0.05)。RT-PCR结果显示:ANXA2在肾透明细胞癌组织及癌旁正常肾组织中的m RNA相对表达量分别为(0.4301±0.0634)、(0.2161±0.0242),肾透明细胞癌组明显高于癌旁组(P<0.05);t-PA在肾透明细胞癌组织及癌旁正常肾组织中的m RNA相对表达量分别为(0.4397±0.0728)、(0.2399±0.0211),肾透明细胞癌组显著高于癌旁组(P<0.05);2 ANXA2在肾透明细胞癌组织中的表达情况为:Ⅲ-Ⅳ期患者的肾透明细胞癌组织标本中ANXA2的阳性表达率显著高于Ⅰ-Ⅱ期患者(P<0.05),低分化患者的肾透明细胞癌组织标本中ANXA2的阳性表达率也显著高于高、中分化患者(P<0.05)。t-PA在肾透明细胞癌组织中的表达情况为:Ⅲ-Ⅳ期患者的肾透明细胞癌组织标本中t-PA的阳性表达率显著高于Ⅰ-Ⅱ期患者(P<0.05),低分化患者的肾透明细胞癌组织标本中t-PA的阳性表达率也显著高于高、中分化患者(P<0.05)。并且ANXA2和t-PA在45例肾透明细胞癌组织中的表达情况与患者的性别、年龄无关;3 ANXA2和t-PA在肾透明细胞癌的表达水平具有正相关性(r=0.524,P<0.05)。结论:1 ANXA2和t-PA在肾透明细胞癌组织中的表达均显著高于在对照组中的表达,提示二者可能促进了肿瘤细胞的发生、发展。2 ANXA2和t-PA蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达水平与患者的性别和年龄无关,而与肾透明细胞癌的病理分级和临床分期的恶性程度呈正相关关系,说明二者对癌细胞的浸润和转移具有重要意义。3 ANXA2和t-PA蛋白在肾透明细胞癌组织中的异常高表达具有正相关性,说明二者在肿瘤的发展进程中有协同作用。4 ANXA2和t-PA有望成为评估肾透明细胞癌发展、变化的有标记物,随着对其在肾透明细胞癌中的作用机制的进一步研究,二者更有可能为肾透明细胞癌的治疗提供新的思路,成为有效的治疗靶点