NSA2在激光诱导的小鼠脉络膜新生血管模型中表达的时相性和定位研究

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目的:(1)建立小鼠脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)动物模型;(2)采用RT-PCR、Western blot和免疫荧光染色技术对NSA2(Nop seven-associated2)在C57BL/6J小鼠CNV动物模型眼组织中的表达情况进行研究,以期为探讨湿性AMD的发病机制提供新的实验依据和理论依据。方法:(1)采用532nm氩激光诱导C57BL/6J小鼠CNV动物模型;(2)取光凝后14d组小鼠眼做脉络膜铺片,用CD31抗体标记血管内皮细胞的方法对CNV模型进行鉴定;(3)采用RT-PCR和Westernblotting方法检测正常对照组和光凝后1d、3d、5d、7d和14d组小鼠CNV中NSA2mRNA和蛋白的表达变化情况进行研究,得出光凝后不同时间点NSA2在CNV模型鼠眼组织中表达的时间变化规律;(4)取光凝后7d组小鼠眼球做冰冻切片,用免疫荧光染色方法对NSA2蛋白在CNV模型鼠眼组织中的表达进行定位研究。结果:(1)在本课题中,我们用532nm氩激光成功稳定的诱导出了C57BL/6J小鼠CNV动物模型,能满足该课题中所有实验的需要。(2)PCR结果显示NSA2mRNA在正常成年C57BL/6J小鼠视网膜-脉络膜-巩膜复合物中弱表达。视网膜光凝后,NSA2mRNA在CNV模型眼的视网膜-脉络膜-巩膜复合物中的表达有明显的时间变化规律,光凝后1d NSA2的表达开始上调,1~3d逐渐增强,3d达高峰,之后其表达逐渐减弱。其中,光凝后1d、3d、5d、7d组NSA2mRNA的表达明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);光凝后14d组NSA2mRNA的表达与正常对照组相比无统计学意义(P>0.05);光凝后3d组NSA2mRNA的表达量明显高于其余各组,差别有统计学意义(P<0.05)。(3)Western blot结果显示,NSA2蛋白在正常成年C57BL/6J小鼠视网膜-脉络膜-巩膜复合物中呈弱表达。光凝后1dNSA2蛋白的表达开始上调,3d达高峰,之后逐渐下降,14d组NSA2蛋白的表达与正常组相比仍有明显差异(P<0.05);光凝后3d组和5d组NSA2蛋白的表达量明显高于其余各组,差异明显(P<0.05),但3d组和5d组组间比较,未见明显差异(P>0.05)。(4)免疫荧光染色结果显示NSA2蛋白在正常小鼠视网膜外丛状层有较强表达;在光凝后7d组CNV模型鼠眼组织中,除了在视网膜外丛状层中NSA2蛋白呈高表达外,在组织增生活跃的CNV形成区域也可检测到较强的NSA2蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NSA2在CNV形成早期表达上调,具有明显的时间变化规律,且在CNV区域有较强的表达,因此我们推断NSA2可能在CNV形成这一病理过程中起着重要作用。
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