研究背景和意义:肝癌是全球最常见的10种恶性肿瘤之一。肝癌的早期症状不明显,病程发展迅速,当典型症状、体征出现后,病情常已较晚。肝癌的外科治疗是肝细胞癌病人获得长期生存最重要的手段,但肝癌手术切除后5年肿瘤复发转移率高达40%~70%。近年来,分子靶向药物在临床的应用出现很大的进展,分子靶向药物索拉非尼对于不同肝病背景的晚期肝细胞癌都具有一定的生存获益。这为我们的科研提供了思路,找到新的药物治疗靶标对于肝癌的诊疗意义重大。在前期实验中我们发现ECD可以抑制hnRNPK的泛素化降解,从而上调hnRNPK的蛋白表达水平,促进肝细胞癌细胞的增殖、克隆形成和侵袭转移,为了找寻其中的具体机制,我们通过质谱检测找到了影响hnRNPK泛素化降解的泛素化连接酶E3,即本实验所研究的HERC1,因此,本论文着重研究HERC1在ECD调控hnRNPK表达水平过程中所扮演的角色,探讨HERC1参与调控的作用机制,希望为肝细胞癌的靶向治疗提供依据。方法与结果:1.通过免疫共沉淀实验证实了ECD蛋白与HERC1蛋白之间存在相互作用。2.通过免疫共沉淀实验证实了hnRNP K蛋白与HERC1蛋白之间存在相互作用3.通过免疫共沉淀组合实验证实了ECD蛋白阻碍hnRNPK蛋白与HERC1蛋白之间的相互作用4.通过琼脂糖凝胶电泳实验证实了HERC1在转录水平不影响hnRNPK的表达。5.通过Western Blot实验证实了沉默HERC1在转录后水平上调hnRNPK的表达。6.通过Western Blot实验证实了沉默HERC1在转录后水平增强了hnRNP K蛋白的稳定性。7.通过Western Blot实验证实了沉默HERC1抑制hnRNP K蛋白的泛素化降解。8.通过组合泛素化实验证实了过表达ECD、沉默HERC1后抑制hnRNP K蛋白的泛素化降解。9.通过Western Blot实验、细胞生长实验、Transwell小室、克隆形成实验等方法,证实了沉默HERC1可促进肝癌细胞增殖、迁移侵袭及克隆形成能力。结论:1.体外实验证实了沉默HERC1能够促进肝癌细胞的生长、克隆形成、侵袭迁移。2.ECD通过阻断E3连接酶HERC1介导的hnRNPK泛素化降解促使肝癌细胞的增殖、克隆形成和侵袭转移。