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目的:1.观察含绿色荧光蛋白(GFP)基因的干细胞白血病基因(SCL)重组慢病转染体外高糖环境下膀胱Cajal样间质细胞的形态学变化。2.观察经尿道灌注含绿色荧光蛋白(GFP)基因的SCL基因重组慢病毒转染豚鼠DCP(diabetic cystopathy,DCP)膀胱对Cajal样间质细胞的形态学影响。方法:1.构建SCL基因重组慢病毒且标定滴度;2.体外分离培养豚鼠膀胱ICC(interstitial cells of Cajal,ICC),分别用5mmol/L,15mmol/l和25mmol/l葡萄糖浓度处理24小时,然后每个浓度下分为空白对照组(加1%PBS),空慢病毒对照组(加空慢病毒),慢病毒转染组(加携带人SCL基因慢病毒),转染2d、3d、5d时,用激光共聚焦显微镜观测各组ICC的状态和数量变化及GFP表达。3.构建DCP豚鼠模型;观察经尿道灌注SCL基因重组慢病毒对豚鼠DCP膀胱组织中ICC数量、分布及超微结构的影响;结果:1.病毒滴度测定是5×108TU/ml;2.显微镜下可见典型的膀胱ICC形态及高葡萄糖浓度(15 mmol/L和25 mmol/L)受损的细胞形态,免疫荧光法可见特异性c-kit受体成功表达;慢病毒转染成功导入SCL基因至ICC中;在15 mmol/L葡萄糖浓度下,SCL基因的导入可陆续恢复形态损伤的ICC。在25 mmol/L葡萄糖浓度下,能够改善却没能恢复形态损伤的ICC,此外,SCL基因未使ICC数量得到恢复或增殖。3.糖尿病豚鼠诱导成功率为47.7%;诱导DCP豚鼠27只;激光共聚焦显微镜下观察发现:实验组中随7d、14d、28d时间的延长,ICC数量逐渐增多(P<0.05),分布逐渐密集,绿色荧光逐渐减弱。空白对照组和阳性对照组中随7d、14d、28d时间的延长,ICC数量逐渐减少(P<0.05),分布稀疏,因无GFP表达,未见绿色荧光;透射电镜下观察发现:实验组中随7d、14d、28d时间的延长,ICC的细胞器数量增多、形态趋于正常、细胞内空泡减少、胞周突起延长变多,受损的ICC的超微结构在不断的恢复之中。空白对照组和阳性对照组中随7d、14d、28d时间的延长,ICC的胞器数量减少、形态不规则、胞内空泡样变增多、胞周突起稀少,ICC的超微结构未见改善。结论:1.SCL基因重组慢病毒载体转染体外高糖环境下培养的ICC,可将SCL基因导入ICC中,能够恢复或改善受损的ICC形态。2.经尿道灌注SCL基因重组慢病毒转染豚鼠DCP膀胱后,对ICC形态和数量的恢复有一定收效,对DCP达到一定程度的治疗效果。能进一步为使用SCL基因重组慢病毒对DCP的基因治疗提供思路。