三种LncRNAs在黑色素瘤细胞中作用的研究

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目的体外实验研究LncRNAs(RP11-875O11.3-001、RP11-496I2.2、RP11-379K17.12-001)在人皮肤恶性黑色素瘤细胞A375、A875以及正常人表皮黑素细胞HEM-M中的表达,及其对黑色素瘤细胞增殖、侵袭、周期、凋亡的影响。方法体外培养人黑色素瘤细胞株A375、A875以及正常人表皮黑素细胞HEM-M,通过实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)分别检测A375、A875、HEM-M中LncRNA RP11-875O11.3-001、LncRNA RP11-496I2.2、LncRNA RP11-379K17.12-001的表达水平;将A375、A875、HEM-M细胞分别转染相应的siRNA,降低目标LncRNA的表达水平(分为实验组和对照组,其中实验组是使用目的基因siRNA进行转染;对照组则使用阴性对照siRNA进行转染,用于说明siRNA作用的特异性,作为分析目的基因siRNA作用的参照);质粒转染后,分别通过CCK8实验检测(24h、48h、72h)450nm处细胞的吸光度来反映细胞增殖情况;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;流式细胞技术来测定细胞周期和细胞凋亡率。结果与HEM-M相比,LncRNA RP11-875O11.3-001、LncRNA RP11-496I2.2、LncRNA RP11-379K17.12-001在A375、A875中呈高表达,差异有统计学意义(均P<0.05)。通过质粒转染,分别敲低细胞中RP11-875O11.3-001、RP11-496I2.2、RP11-379K17.12-001的表达,实验组中三种LncRNAs的表达水平均显著低于对照组,差异有统计学意义(均P<0.001)。CCK8实验结果显示,在A375细胞中,三种LncRNAs的实验组在(24h、48h、72h)三个时段的OD450均低于对照组(P<0.05),在A875细胞中,三种LncRNAs的实验组在72h的OD450均低于对照组(P<0.05);在HEM-M细胞中,三种LncRNAs的实验组在三个时段的OD值与对照组相比无差异(P>0.05)。Transwell小室实验结果显示敲低三种LncRNAs的表达,黑色素瘤细胞A375、A875中实验组穿膜细胞数均低于对照组,且结果具有统计学差异(均P<0.05)。流式细胞术检测周期结果显示与对照组相比,实验组的A375、A875细胞G0/G1期细胞增加(均P<0.05),S期减少(均P<0.05)。凋亡实验结果表明实验组A375、A875细胞凋亡率均高于对照组,且差异具有统计学意义(均P<0.05),HEM-M凋亡率无影响(P>0.05)。结论黑色素瘤细胞株A375、A875中RP11-875O11.3-001、RP11-496I2.2、RP11-379K17.12-001均呈高表达;CCK8实验表明:敲低LncRNAs表达水平可抑制黑色素瘤细胞A375、A875的增殖,对正常表皮黑素细胞HEM-M的增殖无影响。Transwell及流式细胞实验表明:分别下调LncRNA RP11-875O11.3-001、LncRNA RP11-496I2.2、LncRNA RP11-379K17.12-001的表达水平均能抑制黑色素瘤细胞的侵袭能力,并诱导黑色素瘤细胞凋亡,同时导致黑色素瘤细胞生长阻滞于G0/G1期。LncRNA RP11-875O11.3-001、LncRNA RP11-496I2.2、LncRNA RP11-379K17.12-001可能参与黑色素瘤的恶性进程,本研究结果显示了LncRNAs在黑色素瘤发生发展中的重要作用,并可能成为黑色素瘤治疗的新靶点。
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