【目的】（1）了解北京地区嗜麦芽窄食单胞菌感染的危险因素及其耐药特征，并探讨不同来源菌株耐药率间的差别。（2）评价复方磺胺甲恶唑（SXT）与替卡西林／克拉维酸（TCC）、头孢哌酮／舒巴坦（CFS）两种β内酰胺／酶抑制剂联合应用对于嗜麦芽窄食单胞菌的体外联合抗菌效应。（3）对北京地区6家医院重症监护病房临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌通过脉冲场凝胶电泳（pulsed field gel electrothotesis PFGE）进行基因分型，了解有无爆发流行及传播情况。（4）通过多重PCR对临床菌株进行扩增及整合子分类，了解国内嗜麦芽窄食单胞菌中1、2、3类整合子的流行现状。（5）对整合酶阳性菌株进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列，了解嗜麦芽窄食单胞菌所携带的耐药基因盒的种类、特点及与嗜麦芽窄食单胞菌耐药的关系。（6）通过检测嗜麦芽窄食单胞菌基因组DNA和质粒DNA，并结合PCR进一步对整合酶的基因定位分析，了解是通过染色体还是质粒传播。（7）检测整合子3’端sulI耐药基因，经测序并与GenBank注册的耐药基因sulI序列进行比对，分析同源性，分析整合子、磺胺耐药基因对细菌耐药表型的影响，为临床合理应用抗生素提供依据。【方法】（1）对北京地区6家三级甲等医院临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌145株，经采用VITEK-Ⅱ微生物鉴定系统重新鉴定，采用微量肉汤稀释法测定12种抗生素的最低抑菌浓度，并对临床资料进行统计分析。（2）采用棋盘法设计，微量肉汤稀释法测定不同浓度组合的2组抗菌药物对30株嗜麦芽窄食单胞菌的最低抑菌浓度，并计算FIC指数，判断联合效应。（3）通过脉冲场凝胶电泳对北京地区6家医院重症监护病房临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌进行基因分型，明确是否为同一菌株的克隆。（4）根据GenBank／EMBL内的第一、二和三类整合酶基因序列，通过对3类整合酶基因序列的多重对比分析，分别设计出第一、二和三类的特异性引物，建立同时能检测第一、二和三类整合酶基因的多重PCR方法，应用这一方法对嗜麦芽窄食单胞菌进行携带整合酶基因的筛选，了解携带整合酶情况。（5）对整合酶阳性菌株进一步以保守序列引物扩增，测序分析，所得结果在GenBank数据库中进行同源性比对，了解可变区中含有的基因盒。（6）整合子的基因定位：为了明确整合子来源于染色体还是质粒，对整合子阳性菌株应用A型超纯质粒提取试剂盒提取质粒，结合PCR进一步对整合酶基因进行定位分析。（7）根据磺胺耐药基因sulI序列设计引物，应用PCR方法扩增出sulI全长基因序列，经测序并与GenBank注册的耐药基因sulI序列进行比对，分析同源性，并与耐药表型比较。（8）分析整合子，磺胺耐药基因对细菌耐药表型的影响，进一步探讨细菌的耐药机制，以指导临床药物治疗。【结果】（1）145株嗜麦芽窄食单胞菌的标本来源以痰标本为主，占86.2％，其临床分布以ICU（56.5％）和呼吸科（20.6％）为主。该菌对常用抗生素耐药，敏感性超过50％的抗菌药物依次为多西环素、加替沙星、头孢哌酮／舒巴坦、左氧氟沙星、复方磺胺甲恶唑、头孢他定／克拉维酸、替卡西林／克拉维酸。各医院的感染菌株对部分抗菌药物的耐药性存在差异，中国人民解放军总医院第一附属医院临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌对复方磺胺甲恶唑耐药严重。在感染患者中，56.7％患有基础疾病，92.2％先期使用过广谱抗生素，78.6％接受过侵入性检查和治疗。（2）复方磺胺甲恶唑对嗜麦芽窄食单胞菌的MIC为2，与替卡西林／克拉维酸、头孢哌酮／舒巴坦联合应用后，其MIC₅₀显著降低至0.5，FIC指数分布范围主要在0～1。（3）82株嗜麦芽窄食单胞菌经PFGE指纹图谱分析显示7～18条大小不等的DNA片断，同源性在80％以上的有5对发生在同一医院ICU病房，其中北医三院有3株菌属于同一克隆，来自不同医院的两对嗜麦芽窄食单胞菌分别为80.6％、79.6％同源，其余菌株则显示了较低的同源性或者无同源性。（4）82株临床菌株进行多重PCR扩增，11株在565bp处有扩增片断，即为含有第一类整合酶基因，阳性率为13.4％，3株在403 bp有扩增片断，即含有第二类整合酶基因，且3株在565bp和403bp处均有扩增片断，表明同时含有第一、二类整合酶基因int1和int2，在被测菌株中末发现第3类整合酶基因的阳性产物。（5）对Ⅰ类整合酶阳性菌株用质粒作为模板进行整合酶基因扩增，有2株阳性。（6）Ⅰ类整合子可变区扩增阳性产物，有3种不同长度片段，5株出现659bp阳性条带，测序结果显示含1个开放读码框，与耐药基因aadB 100％同源，对氨基糖苷类抗菌药物耐药，GenBank登录号AY123253；3株出现1091bp的阳性条带，测序结果为整合子内部插入一个dfrA17基因，编码二氢叶酸还原酶，对磺胺类耐药，和一个aadA5基因盒，对氨基糖苷类抗菌药物耐药，GenBank登录号DQ838665；1株出现2366bp的条带，序列对比结果含3个开放读码框，aacA4-aphA15-aadA1，对氨基糖苷类抗菌药物耐药，GenBank登录号Y18050。（7）82株嗜麦芽窄食单胞菌20株sulI基因阳性，结果在GenBank上Blast为磺胺耐药基因，与DQ881445序列符合率为100％。（8）在Ⅰ类整合子阳性和阴性菌株的耐药性对比分析中发现，整合子阳性菌株对氨基糖苷类、磺胺类抗菌药物耐药率明显高于整合子阴性菌，提示整合子对细菌的耐药性传播有重要作用。【结论】（1）嗜麦芽窄食单胞菌对常用的抗生素耐药，但对喹诺酮类、头孢哌酮／舒巴坦、复方磺胺甲恶唑、头孢他定／克拉维酸、替卡西林／克拉维酸仍保持一定敏感性。嗜麦芽窄食单胞菌感染多发生在重症监护病室，多见于患有各种基础疾病、免疫力低下的患者。（2）复方磺胺甲恶唑与替卡西林／克拉维酸、头孢哌酮／舒巴坦2种β内酰胺／酶抑制剂联合应用后，对嗜麦芽窄食单胞菌表现为协同作用和相加作用，并以协同作用为主，抗菌活性增强。（3）分子流行病学显示，北京地区6家医院ICU病房嗜麦芽窄食单胞菌由72种（?）同克隆构成，表现为基因多态性。中国人民解放军总医院第一附属医院存在院内感染的嗜麦芽窄食单胞菌的优势克隆。（4）多重PCR筛选嗜麦芽窄食单胞菌整合酶基因效果良好，具有可行性，为更加全面细致研究整合子类型以及整合子介导的细菌耐药机制提供了一种简单易行、快捷有效的方法。（5）Ⅰ类整合子在嗜麦芽窄食单胞菌中存在的比例较其他革兰氏阴性菌低，检出率为13.4％，其中3株同时含有Ⅱ类整合酶，国内外未见报道。（6）整合子多存在染色体上，在质粒上的仅有2株，说明嗜麦芽窄食单胞菌由质粒介导的水平传播耐药情况还比较少见。（7）整合子结构分析中发现6个不同耐药基因盒结构的整合子，Ⅰ类整合子所携带的耐药基因盒绝大多数为aadB、dfrA17，介导对氨基糖苷类、磺胺类抗菌药物耐药；β-内酰胺耐药基因盒在整合子中不起主要作用。（8）整合子携带的耐药基因盒是嗜麦芽窄食单胞菌对氨基糖苷类及磺胺耐药的主要原因。Ⅰ型整合子和sulI基因的表达，将使磺胺类药物的应用受到一定的限制。