论文部分内容阅读
目的：研究全身麻醉药物异氟醚对ReNcell CX人神经干细胞存活、增殖和分化以及细胞内钙离子稳态的影响，探讨钙离子稳态与异氟醚介导的ReNcell CX人神经干细胞存活、增殖和分化作用的关系。 方法：将体外培养的ReNcell CX人神经干细胞暴露于不同时间（6小时，12小时和24小时）、不同浓度的异氟醚（0.6％，1.2%和2.4%）、Xc（50nM，100nM，200nM和500nM）或丹曲林（10μM，20μM，50μM，100μM和200μM）后，测定LDH释放的量和MTT的值，研究异氟醚、Xc和丹曲林对ReNcell CX人神经干细胞损伤、存活的影响；暴露结束后，加入BrdU4小时，应用免疫荧光显微镜，检测BrdU阳性细胞数，研究异氟醚、Xc和丹曲林对ReNcell CX人神经干细胞增殖活性的影响；药物处理前，将培养基转换为分化培养基，处理结束后继续在分化培养基内培养3天，然后应用免疫荧光显微镜，检测 Tuj1和GFAP阳性细胞数，研究异氟醚、Xc和丹曲林对ReNcell CX人神经干细胞分化命运的影响；应用fura-2/AM双波长合成指示剂法，测定细胞内钙离子浓度，研究异氟醚对胞浆内钙离子稳态的影响。 结果：异氟醚通过激活InsP3受体和/或ryanodine受体可以诱导 ReNcell CX人神经干细胞内钙离子浓度升高，2.4%异氟醚预处理1小时，可以部分消除异氟醚诱导的ReNcell CX人神经干细胞胞浆内钙离子浓度增高。异氟醚呈剂量依赖性和时间依赖性诱导 ReNcell CX人神经干细胞损伤、抑制ReNcell CX人神经干细胞存活、抑制ReNcell CX人神经干细胞增殖和向神经元方向分化、促进ReNcell CX人神经干细胞向星形胶质细胞分化。InsP3受体拮抗剂Xc和ryanodine受体拮抗剂丹曲林单独应用时对ReNcell CX人神经干细胞没有明显的损伤作用，不影响ReNcell CX人神经干细胞分化命运，但是Xc可以呈浓度依赖性抑制ReNcell CX人神经干细胞存活和增殖，高浓度丹曲林可以抑制ReNcell CX人神经干细胞增殖。2.4%异氟醚短期暴露（1小时）预处理可以消除2.4%异氟醚长期暴露（24小时）诱导的ReNcell CX人神经干细胞损伤、星形胶质细胞分化增加以及对存活、增殖和向神经元方向分化的抑制。InsP3受体拮抗剂 Xc以及 ryanodine受体拮抗剂丹曲林不但可以拮抗2.4%异氟醚暴露24小时诱导的细胞毒性作用，而且可以拮抗2.4%异氟醚预处理诱导的神经保护作用。 结论：异氟醚通过激活ReNcellCX人神经干细胞内质网膜InsP3受体和/或ryanodine受体，引起内质网钙离子释放进入胞浆，导致细胞内钙离子稳态浓度改变，介导神经毒性和神经保护的双向作用。