目前，随着雄黄在肿瘤治疗中的应用日益为人们所关注，它的水难溶解性所造成的制剂困难，提高其生物利用度，拓宽临床应用等问题迫切需要解决。本研究采用微生物对雄黄进行生物浸出处理以提高其溶解度和生物利用度：利用实验室分离的氧化亚铁硫杆菌和或氧化硫硫杆菌制备雄黄的浸出液并对工艺进行系统的研究；以白血病K562和K562ADM细胞为模型，研究了雄黄的浸出液对肿瘤细胞增殖的影响及其诱导细胞凋亡的作用；采用毛细管电泳分析法对雄黄生物浸出液进行分离分析以期确定它的药效成分；对雄黄生物浸出液的急性毒性和药物动力学进行考察。主要研究结果如下： 1．在有和没有亚铁离子的浸出体系下，氧化亚铁硫杆菌、氧化硫硫杆菌制备雄黄的浸出液的最佳浸出条件为：30℃，pH 1.80，150转/分，浸出时间30天。在浸出体系有铁离子参与时，雄黄浸出液中砷的浸出率与无亚铁离子的浸出体系的相比，有很大的提高。氧化亚铁硫杆菌组雄黄浸出液中砷的浸出率，从10％迅速增长到43％；而氧化硫硫杆菌组仅从21％变化到23％；雄黄混合菌浸出液中砷的浸出率提高最快，从16％增加到56％只需20天。因此混合菌生物浸出雄黄是最佳工艺。通过电镜扫描，能谱技术和X-射线衍射技术对细菌与雄黄作用的研究结果表明，混合菌作用雄黄是直接和间接作用的综合结果。 2．为确证雄黄生物浸出液的生物效应，以相同浓度亚砷酸和常规粉体作为对照组，用噻唑蓝(MTT)方法研究了三者对K 562和K562ADM细胞增殖的影响；应用激光共聚焦荧光显微镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术及RT-PCR技术研究其诱导细胞凋亡的作用。实验结果表明雄黄浸出液可明显抑制K562和K562ADM细胞生长，诱导细胞凋亡，具体表现为细胞体积缩小、细胞核的浓缩、典型的“DNAladder”电泳条带和较高的凋亡率。细胞经特异性抗体荧光标记，流式细胞术以及RT-PCR等研究，雄黄浸出液可使白血病细胞Fas和Caspase-3蛋白的表达的上调，bcl-2蛋白或p-gp蛋白的表达下调，这可能是雄黄微生物浸出液诱导K562和K562ADM细胞凋亡的重要的分子机制。以上结果表明雄黄浸出液比原料雄黄表现出更强的细胞生长抑制和凋亡诱导效应，且在此过程中，雄黄浸出液可能是通过释放可溶性砷，来发挥其诱导细胞凋亡的作用。 3．用毛细管区带电泳法可以简单，快速，有效的分析雄黄浸出液的四种砷类化合物(As<Ⅲ>、iAs<Ⅴ>、MMA<Ⅴ>和DMA<Ⅴ>)。采用优化条件BGE:PDC/10mM与CTAOH/1mM分离条件：电压25 kV、温度25℃、pH 11.0、紫外检测波长设定在216nm。通过比较可以看出，雄黄浸出液与砷酸所含砷类化合物的种类部分相同(As<Ⅲ>和iAs<Ⅴ>)，其中混合菌浸出液与砷酸成分差异最大，同时含有三种砷化合物(As<Ⅲ>和iAs<Ⅴ>MMA<Ⅴ>)。 4．急性毒性实验表明：雄黄制备成雄黄浸出液后急性毒性增大。小鼠灌胃或小鼠腹腔半数致死量LD<,50>：雄黄氧化硫硫杆菌组毒性最大(0.0346±0.0030mg/ml)，其次为混合菌组(0.0737±0.0080 mg/ml)，再次为氧化亚铁硫杆菌组(0.2351±0.034 mg/ml)，然后才为亚砷酸(0.2656±0.0338 mg/ml)和常规粉体(83.701±0.6912 mg/ml)。从这一点上来讲，雄黄中的溶解砷具有毒性与活性的双向作用。按照剂量与LD50比值相同的原则，筛选毒性与亚砷酸相近的雄黄氧化亚铁硫杆菌浸出液，适当调整浸出液的给药剂量，进行药物动力学研究，防止中毒反应发生，是非常有必要的。 5．雄黄制成氧化亚铁硫杆菌浸出液后，对砷在大鼠体内的吸收和消除过程均有影响。雄黄常规粉体经口服形式给药，所含砷在大鼠心、肝、脾、肺、脑等组织的分布远远大于以腹腔注射雄黄浸出液和亚砷酸。雄黄亚铁硫杆菌浸出液及亚砷酸组的AUC值分别比常规粉体的AUC值增加了294.38％和275.73％。经过调整氧化亚铁硫杆菌浸出液的给药剂量后，雄黄的药用剂量减少，其生物利用度大大提高，毒性降低，药效提高。这就使得采用微生物对雄黄进行生物浸出处理以提高其溶解度和生物利用度的研究，具有很强的实用性。