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原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全世界最常见的恶性肿瘤之一,在我国位于癌症死亡率的第二位。近年来,虽然我国的HCC治疗取得了长久的进步,其早期诊断率、手术切除率、术后生存率及生存质量均有较大提高,但是目前HCC的发病率及死亡率仍占癌症的第二位。HCC的治疗方法的选择取决于肿瘤的分期及肝功能情况,对不能手术切除及不能耐受手术者,可以采取肿瘤的局部及全身治疗相结合的方法。但目前非手术治疗的疗效有限。故寻找有效的治疗药物是提高存活率、降低复发率及改善生活质量的重要手段,具有重要意义。白藜芦醇(Resveratrol,Res)是一种非黄酮类多芬化合物,广泛存在于植物。具有抗炎、抗氧化、保护心血管等作用。近年来各项研究表明,白藜芦醇对体外培养的多种人类肿瘤细胞存在一定的抑制和细胞毒作用,如肝癌、胃癌、乳腺癌、结肠癌等。其药用已成为研究热点,为此我们以肝癌细胞株HepG2细胞为研究对象,进一步了解白藜芦醇治疗肝癌的效果并探讨其作用机制,为白藜芦醇临床治疗肝癌提供理论基础。第一章白藜芦醇对肝癌HepG2细胞的影响目的：观察白藜芦醇对肝癌细胞HepG2的生长抑制、细胞毒作用,并分析其意义。方法：体外培养肝癌细胞株HepG2,分别采用不同浓度白藜芦醇处理细胞,通过MTT法观察HepG2细胞增殖情况,计算IC50,选择最佳时间点和浓度进行后续实验,包括细胞形态观察,MTT实验检测增殖能力和流式细胞仪检测凋亡比例。同时体外培养正常肝细胞L02进行对比。结果：(1)MTT法检测白藜芦醇对HepG2细胞增殖抑制,计算IC50：①白藜芦醇对HepG2细胞增殖具有抑制作用,并随药物浓度的增加而明显增强(p<0.01)；同浓度72h、48h的细胞抑制率同24h比较升高,存在统计学差异(p<0.01),同浓度72h的细胞抑制率同48h比较升高,无统计学意义；②测得24h、48h和72h的白藜芦醇对HepG2细胞的IC50分别为77.02±5.13μg/ml、22.76±1.78μg/ml和18.22±1.64μg/ml,48h和72h IC50值比较无统计学意义；③0μg/ml-80μg/m1白藜芦醇作用HepG2细胞的抑制率<0.3,药敏阴性,白藜芦醇对L02细胞的生长抑制作用不明显。(2)检测各组细胞的增殖能力和凋亡情况：①显微镜观察细胞形态改变：白藜芦醇和5-FU作用48h后,HepG2细胞开始明显变化,皱折,细胞边界不清楚,折光性差,细胞漂浮；而HepG2细胞阴性对照组、白藜芦醇作用L02细胞48h后,表现为细胞边缘光滑清晰、细胞减少不明显；②MTT法：L02细胞白藜芦醇组、HepG2细胞白藜芦醇组、HepG2细胞5-FU组的抑制率为9.0、49.3%、54.7%,HepG2细胞白藜芦醇组、HepG2细胞5-FU组的细胞抑制率分别和HepG2细胞阴性对照组、及L02细胞白藜芦醇组进行比较,差异具有统计学意义(p<0.01),前两组之间差异有统计学意义(p<0.01),后两组之间差异无统计学意义。③)Annexin V-FITC双标法检测凋亡比例：HepG2细胞阴性对照组、L02细胞白藜芦醇组、HepG2细胞白藜芦醇组、HepG2细胞5-FU组的细胞凋亡率分别为3.79%、4.62%、21.15%、24.95%,HepG2细胞白藜芦醇组、HepG2细胞5-FU组的细胞抑制率分别和HepG2细胞阴性对照组、及LO2细胞白藜芦醇组进行比较,差异具有统计学意义(p<0.01),前两组之间差异有统计学意义(p<0.01),后两组之间差异无统计学意义。结论：(1)白藜芦醇对人肝癌细胞HepG2起增殖抑制和促进凋亡作用,成时间-浓度依赖性；(2)白藜芦醇对L02细胞的增殖无明显影响。第二章白藜芦醇对HepG2细胞作用机制的探讨目的：检测MnSOD、SIRT3、P53、Bax、 Fas在白藜芦醇作用下HepG2细胞中的表达。方法：通过CuZn/Mn-SOD活性检测试剂盒(WST)法检测HepG2细胞中MnSOD酶活力的改变。通过RT-PCR、Western-blot检测SIRT3、 P53、Bax、Fas在白藜芦醇作用下HepG2细胞中的表达。结果：WST法结果显示,白藜芦醇作用HepG2细胞48h后,MnSOD酶活性增强,RT-PCR实验结果显示,白藜芦醇作用HepG2细胞48h后,SIRT3、Fas、Bax和p53mRNA在HepG2细胞中的表达增高(p<0.01)。Western-blot实验结果显示,白藜芦醇作用HepG2细胞48h后,SIRT3、Fas、Bax和p53蛋白在HepG2细胞中的蛋白表达增高(p<0.01)。结论：白藜芦醇能使SIRT3在HepG2细胞中高表达,从而上调MnSOD及p53表达水平,进而上调Bax、Fas来诱导细胞凋亡。总结论：(1)白藜芦醇对人肝癌细胞HepG2起增殖抑制和促进凋亡作用,成时间-浓度依赖性。(2)白藜芦醇能使SIRT3在HepG2细胞中高表达,从而上调MnSOD及p53表达水平,进而上调Bax、Fas来诱导细胞凋亡。