论文部分内容阅读
目的：Ghrelin作为人类生长激素释放肽，不仅在调节各种生理代谢活动发挥作用，而且在肝炎发生发展中具有抗炎、抗纤维化、保护肝脏组织的作用。本研究通过探讨广西人群中ghrelin基因rs27647（-604G/A）、rs26311（-1062G> C）、rs34911341（Arg51Gln）、rs696217（Leu72Met）四个位点基因多态性与HBV背景下慢性肝炎（CHB）、肝硬化(LC)、肝癌(HCC)发生发展过程中的遗传易感性，获得有意义的基因位点和单倍型。方法：随机选取健康体检者167例作为对照组，筛选来自广西地区HBV相关性肝炎176例、肝硬化106例、肝癌151例。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术分别检测ghrelin基因rs27647、rs26311、rs34911341、rs696217四个位点单核苷酸多态性，并利用DNA直接测序法验证与PCR-RFLP的符合度,计算其基因型及等位基因频率。采用ELISA法检测各组对应的ghrelin血清水平。应用在线软件检验各位点的哈温平衡。基因型及等位基因频率在病例组与对照组之间的分布差异运用卡方检验分析。采用Logistic回归分析校正性别和年龄混杂因素，计算OR值和95%CI，筛选出独立的易感与保护基因型和等位基因。采用方差分析比较对照组与病例组间血清ghrelin水平差异。统计分析采用SPSS16.0软件计算分析, SHEsis在线软件进行单倍型分析。结果：1.对照组和病例组ghrelin基因四个位点的基因型频率在病例组和对照组中均符合哈-温平衡，具有群体代表性（P>0.05）。2.Ghrelin基因rs27647位点有TT、TC、CC三种基因型。三种基因型及其等位基因在各病例组与对照组分布频率差异无统计学意义。Logistic回归分析校正年龄、性别因素后，以TT基因型作为参照，TC和CC基因型未发现与CHB、LC、HCC的发病风险有关(P>0.05)。以T等位基因为参照，C等位基因与CHB、LC、HCC的发病风险无相关性,提示rs27647位点多态性与广西人群CHB、LC、HCC的发病风险无相关性。3.Ghrelin基因rs26311位点有GG、GC、CC三种基因型。三个基因型及其等位基因在各病例组与对照组分布频率差异无统计学意义。Logistic回归分析校正年龄、性别因素后，以GG基因型为参照，GC基因型增加了LC的患病风险（P=0.044,OR=1.671,95%CI：1.013～2.757）；显性模型(GC+CCvs. GG)增加了LC的患病风险（P=0.034,OR=1.674,95%CI：1.040～2.696）。CC基因型和C等位基因未发现与LC的患病风险相关。GC、CC基因型和C等位基因未发现与广西人群CHB、HCC的患病风险相关。4.Ghrelin基因rs34911341位点只有CC、CT两种基因型。只在对照组出现了1个杂合子CT基因型，其余全为CC基因型。5. Ghrelin基因rs696217位点有GG、GT、TT三种基因型，三个基因型及其等位基因在各病例组与对照组分布频率的差异无统计学意义。Logistic回归分析校正年龄、性别因素后，以GG基因型作为参照，GT和TT基因型未发现与CHB、LC、HCC的发病风险有关(P>0.05)。以G等位基因为参照，T等位基因与CHB、LC、HCC的发病风险无相关性，提示rs696217位点多态性与广西人群CHB、LC、HCC的发病风险无相关性。6.对性别分层后,在男性人群中，ghrelin基因rs26311位点在男性人群中，GC基因型与LC患病风险无关，而显性模型与LC的患病风险有关（P=0.042,OR=1.792,95%CI=1.019～2.933），C等位基因与LC的患病风险有关（P=0.040,OR=1.416,95%CI=1.017～1.972）；而rs26311位点在女性人群中各基因型和等位基因均与LC的患病风险无关。rs26311位点在男性人群还是女性人群中，均与广西人群CHB、HCC的发病风险无关。另外，ghrelin基因rs27647和rs696217位点的多态性无论在男性人群还是女性人群中，均与广西人群CHB、LC、HCC的发病风险无关。各SNP位点在对照组、CHB组、LC组和HCC组中男女基因型频率未发现有统计学差异。7.本研究167例广西地区对照组的ghrelin基因rs27647、rs26311、rs34911341、rs696217四个位点基因型和等位基因频率与国际人类基因组单体型图(HapMap)计划中报道的亚洲地区人群结果相似（P>0.05）；而与白种人群，尼日利亚巴丹约鲁巴人群基因频率分布差异较显著(P<0.05)。8. Ghrelin基因rs27647、rs26311、rs696217三个位点CTG单倍型是CHB的保护因素（P=0.0384,OR=0.706,95%CI=0.507～0.982），而CTT单倍型是CHB危险因素（P=0.0223,OR=1.974,95%CI=1.092～3.568）。9.对照组与病例组间血清ghrelin水平差异有统计学意义（P<0.05）。结论：1. Ghrelin基因rs26311位点GC基因型和显性模型可能是广西地区HBV背景下LC患病的危险因素。在性别分层后，rs26311位点显性模型和C等位基因可能是广西地区HBV背景下男性人群LC患病危险因素。2.广西地区人群Ghrelin基因rs27647、rs26311、rs34911341、rs696217四个位点基因型和等位基因频率与亚洲地区人群结果相似；而与白种人群，尼日利亚巴丹约鲁巴人群基因频率分布差异较显著。3. CTG单倍型是CHB的保护因素，而CTT单倍型是CHB的危险因素。