第一部分 目的 研究人眼视网膜各层细胞分布特征，为自适应光学系统提供正常对照，以期阐明其拍到的视网膜细胞的性质。 方法 1．取20个钻取角膜后剩余的眼杯，18个浸入4％多聚甲醛，2个浸入10％中性甲醛，固定1—4周。按Curcio1987年所述方法进行视网膜铺片，中央条带用微分干涉显微镜(DIC)进行观察。首先观察感光细胞内节，中央凹采样6次，均有部分重叠，后沿水平线分别向左右采样，1mm内每隔300um采样一点，每点3次，后每隔1mm采样一点，每点3次至周边部。 2．内节采样完毕，应用193nm准分子激光切削周边视网膜，在PTK模式下，选择不同的切削深度。 3．用OCT观察切削后剩余视网膜厚度。 4．取健康成年SD大鼠肝脏，10％中性甲醛固定，切取直径12~*12~*4mm大小两片，将激光切削后视网膜修剪后夹置于其中，石蜡包埋，常规切片，HE染色，光镜观察，总结激光参数与视网膜剩余厚度之间的关系。 5．根据前一步所得结论，如前应用准分子激光切削后极部视网膜，深度90um，切削部位采用苏木素染色，以前述采样方法微分干涉显微镜观察外核层。采样完毕后，将铺片翻转，神经节细胞向上，如前述激光切削，深度40um，苏木素染色，观察神经节细胞。采样完毕后，原位置继续激光达160um，依上述方法观察内核层。 6．采样完毕用原照片进行细胞计数，中央凹计数框大小以取得最高密度为标准，余应用50umx70um大小计数框。计数框边缘的细胞只计左上边缘，右下边缘不计。 结果 1 OCT测量剩余视网膜厚度，结果发现，部分铺片切削部位与周围视网膜相比厚度没有变化。在厚度有差异的铺片中发现切削深度为60um时，切削部位与周围视网膜相比厚度减少约20-40um，切削深度90um时，厚度测量减少40—60um，误差较大。 2 石蜡切片观察见感光细胞向上切削深度60um-80um时，所有铺片均残余部分感光细胞内节；神经节细胞向上，切削深度40um，所有铺片均残余部分神经纤维层，切削深度160um，视网膜残余部分差异较大，部分标本结构不完整，复口.大学博卜毕业论文染色观察及定位困难。切削后的视网膜未见细胞易位及离散，亦未见细胞形态改变。 3视锥细胞内节l)中央凹小视窗内细胞密度极高，最高密度范围134000一267000/mm，，平均19sogozmm，。2)从中央凹向外密度迅速减少至lmm处为21466/mm2。3)中央凹视锥细胞密度个体变异度Cv值18.2%，0.3mm减少为6.8%。 4视杆细胞内节总体特征l)不存在于中央凹2)存在视杆细胞高密度区，离心度约位于4mm左右，最高值范围72610一182350/ mm，3一smm之间细胞保持高密度3)从高密度区到周边部密度缓慢减少4)于近中央凹个体变异最大55.7%。 5核层视杆细胞1)中央凹不存在视杆细胞核2)于100一200um，随着视杆细胞的出现而出现，后密度迅速上升，至Zmm达44000/m mZ，2一7mm之间密度约44 1 60一43900/mm，。3)个体f司变异随离心度增加而增加，至Zmm维持于10%左右。 6核层视锥细胞l)中央小凹不存在视锥细胞核2)于小凹外出现并立即达到最高密度维持至lmm，计数范围约19390一23970/mm2，于lmm后始迅速下降，3mm处为8170/m mZ。 7神经节细胞中央小凹不存在神经节细胞，离心度增加至200一300um处神经节细胞始出现，Zmm处达最高密度8322/mm2，然后下降。从。一lmm神经节细胞密度个体间差异不大，CV值6.24%一n.67%，离心度Zmm处变异最大，Cv值19.23%。侏儒型神经节细胞占中央凹细胞总数的95%。 8与自适应光学系统进行对照自适应光学系统所得外层细胞在深度及密度变化曲线上符合视细胞锥体的变化特征。 结论 1.激光切削制作视网膜切片损伤小行之有效，是一种有应用价值的新方法。 2.视锥细胞内节密度于中央凹最高，后随离心度迅速下降，中央凹个体变 异极大，与发育有关。 3.视杆细胞杆体在离心度4mm左右存在高密度带，此高密度带的存在是此处视网膜有较好暗视力的基础。 4.视锥细胞核分布不同于锥体，在lmm密度维持于较高水平，个体变异较小。是更为稳定的计数指标。 5.视杆细胞核密度于Zmm处达到高峰，后维持于较高水平，个体变异较视杆细胞内节为小，亦是更稳定的计数指标。 6.神经节细胞不存在于中央小凹，于离心度Zmm处达到最高值，后迅速下降。神经节细胞地形图的特征是发育造成的。中央凹视锥细胞与神经节细胞的传复旦大学博_卜毕业论文导比例可能为3:1。 7.自适应光学系统所拍外层细胞为视细胞锥体层。