羊支原体性肺炎多重PCR病原快速诊断技术与敏感性药物筛选试验研究

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本试验从多重PCR病原快速诊断方法和药物肪治等方面对羊肺炎霉形体病进行了研究,为生产上防治该病提供了科学依据。 建立了一种可以同时识别山羊肺炎支原体和绵羊肺炎支原体的多重PCR检测方法。根据这两类病原的16SrRNA保守核酸序列设计了两对引物,用这两对引物对绵羊肺炎霉形体标准株Y98、丝状支原体亚种PG3、分离物HD株、肺炎霉形体、葡萄球菌、大肠杆菌进行扩增,结果表明标准株Y98、HD株及丝状支原体山羊亚种PG3均扩增出与预期结果相符的466bp和273bp的片段,具有很好的特异性。该方法能检测到1pg的绵羊肺炎霉形体DNA,10pg的丝状支原体山羊亚种DNA,具有高度的敏感性。该多重PCR检测羊传染性胸膜肺炎的病原方法与直接培养法和血清学诊断方法的结果进行比较,可见多重PCR方法与直接培养法的差异显著,多重PCR比直接培养法更敏感;多重PCR方法与血清学方法的差异不显著,两者敏感性差异无统计学意义。但是从统计结果分析可见,多重PCR方法更适合早期诊断。 测定了环丙沙星,氧氟沙星,单诺沙星,红霉素,罗红霉素,泰勒菌素,泰妙菌素,四环素等8种药物对羊肺炎支原体两个标准株Y98租PG3及HD株的体外抑菌浓度以及红霉素与氧氟沙星、泰勒菌素和四环素对PG3和四环素与氧氟沙星、泰勒菌素对Y98的联合药敏作用。结果表明,这8种抗菌药物对PG3和Y98、HD株的MIC(μg/mL)分别为:环丙沙星0.223,0.00223,0.00327;氧氟沙星0.281,0.0140,0.0104;单诺沙星0.136,0.0140,0.013;红霉素0.0218,无效,无效;罗红霉素0.0327,无效,无效;泰勒菌素0.0771,0.0390,0.13;泰妙菌素0.0417,0.0520,0.091;四环素0.1950,0.0520,0.0520。可见红霉素和罗红霉素是PG3的高敏药物,而Y98对喹诺酮类药物高度敏感。氧氟沙星与红霉素、四环素对PG3的联合药敏指数均为1,是相加作用。红霉素与泰勒菌素、四环素对PG3的联合药敏指数均为1.5,是无关作用。四环素与氧氟沙星、泰勒菌素对Y98的联合药敏试验指数均为0.5,是协同作用;泰勒菌素与氧氟杀星的联合药敏试验指数为1,是相加作用。联合药敏试验结果为进一步开发对氧传染性胸膜肺炎高效、价廉的复方新兽药奠定了基础。 用上述药物进行了预防和治疗试验,结果表明泰妙菌素、单诺杀星可作为绵羊肺炎支原体的首选药物,而红霉素和泰勒菌素可作为山羊肺炎支原体的首选药物。预防剂量是5mg/kg.BW,治疗剂量是10mg/kg.BW,疗程是1—2周。
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