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目的:建立脑出血致多器官功能障碍综合征(Cerebral hemorrhage induced multiple organ dysfunction syndrome,CHMODS)伴/不伴膈下迷走神经切断(Subdiaphragamatic vagotomy,SDV)的大鼠模型,针刺及黄连素进行干预,通过监测针刺及黄连素治疗前后模型鼠内毒素、乙酰胆碱、炎症因子表达及心、肺、肾等周围脏器病理及神经功能评分变化,探讨黄连素联合针刺兴奋迷走神经(vagus-never,VN)对CHMODS预后的影响,揭示迷走神经的胆碱能抗炎通路(Vagus-never cholinergic anti-inflammatory pathway,VCAP)在 CHMODS 发生发展中的作用机制。方法:1.204只SD雄性大鼠随机分为10组:正常对照组、假手术组各6只;MODS组、MODS+针刺组、MODS+黄连素组、MODS+针刺+黄连素组,MODS+SDV组、MODS+SDV+针刺组、MODS+SDV+黄连组、MODS+SDV+黄连素+针刺组,各组又分为24h、72h、7d、14d4个亚组,每亚组6只。采用自体血尾状核注入法制备CHMODS大鼠模型,采用膈下迷走神经切断法阻断CHMODS模型鼠迷走神经。术后每日给予黄连素和/或电针足三里(后三里)及耳甲区治疗。2.术后各时相点观察大鼠症状、体征,检测血常规、肝肾功、心肌酶、内毒素等指标。光镜下观察肺、心、小肠、肝和肾组织病理变化。依据盛志勇院士提出的动物全身炎症反应综合征(SIRS)和MODS的诊断标准判断SIRS和MODS的发生率。3.应用改良基质显色法鲎试验测定血清内毒素含量;实时荧光定量聚合酶链式扩增反应(RT-PCR)法检测CD14、TLR4、NF-κB P65mRNA表达;免疫印迹法(WB)检测CD14、TLR4、NF-κ B P65、a7nAchR蛋白表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α、Ach表达。HE染色观察脏器病理变化;longa法评定模型鼠行神经功能,统计各组死亡率。4.实验数据用均数土标准差(x±s)表示,应用SPSS16.0统计软件包进行统计学处理,采用t检验、单因素方差分析、卡方检验、Pearson相关等方法,以P<0.05为差异有显著意义。结果:1.假手术组各脏器偶见轻微的非特异性炎症反应。MODS组肺、小肠、肝、肾、心脏24h即见明显的非特异性炎症损害,72h时仍维持在较高水平,14d时损害明显减轻。MODS+针刺组、MODS+黄连素组各组织24h、72h炎症损害较MODS组轻,但较正常对照组、假手术组、MODS+针刺+黄连素组重,7d时炎症反应明显减轻。MODS+针刺+黄连素组各脏器炎症损害在24h最明显,较MODS组、MODS+针刺组、MODS+黄连素组轻,较正常对照组、假手术组严重,72h时炎症损害明显减轻。MODS+SDV组各脏器在24h、72h时炎症损害均比MODS组重,14d时仍见明显炎症反应。MODS+SDV+针刺组、MODS+SDV+黄连组、MODS+SDV+黄连素+针刺组小肠、肝、肾组织在各时相点损害程度与MODS+SDV组相似,心、肺损害同MODS+针刺组、MODS+黄连素组、MODS+针刺+黄连素组相似。2.假手术组与正常对照组相比,其WBC、ALT、AST、Cr、BUN、CK无显著差异(P>0.05);MODS组上述各项指标各时相点均显著高于假手术组、正常对照组(P<0.05)。MODS+针刺组、MODS+黄连素组上述各指标在7d、14d时相点显著低于MODS组(P<0.05)。MODS+针刺+黄连素组上述各指标在7d显著低于MODS+针刺组、MODS+黄连素组(P<0.05),14d 恢复正常。MODS+SDV 组、MODS+SDV+针刺组、MODS + SDV +黄连组、MODS + SDV+黄连素+针刺组各时相点的WBC、ALT、AST、Cr、BUN均显著高于MODS组、M0DS+针刺组、MODS+黄连素组、MODS+针刺+黄连素组(P<0.05);CK无显著差异(P>0.05)。MODS+SDV+针刺组、MODS + SDV +黄连组、MODS + SDV+黄连素+针刺组WBC、ALT、AST、Cr、BUN各时相点与MODS+SDV组无显著差异(P>0.05),CK14d时显著低于MODS+SDV组。3.鲎试剂法内毒素含量测定:假手术组与正常对照组相比无显著差异(P>0.05)。MODS组内毒素水平24h达到高峰,72h时仍处于较高水平,14d时接近正常。MODS+针刺组、MODS+黄连素组内毒素水平72h时低于MODS组(P<0.05),高于MODS+针刺+黄连素组(P<0.05),显著高于正常对照组和假手术组(P<0.05),14d降至正常。MODS+针刺+黄连素组24h达峰,显著高于正常对照组、假手术组(P<0.05),较MODS组、MODS+针刺组、MODS+黄连素组低(P<0.05),7d时接近正常。MODS+SDV组内毒素各时相均高于 MODS 组、正常对照(P<0.05)。MODS+SDV+针刺组、MODS+SDV+黄连组、MODS+SDV+黄连素+针刺组各时相点与MODS+SDV组无显著性差异(P>0.05)。4.CD14、TLR4、NF-KBP65免疫印记法蛋白表达结果:假手术组与正常对照组相比,在肺、小肠、肝、肾、心脏中仅见基础表达或未见表达且表达无显著差异(P>0.05)。MODS组24h各组织CD14、TLR4、NF-κBP65蛋白表达处于高峰,显著高于正常对照组、假手术组(P<0.05),72h时表达降低,14d较正常对照组无差异(P>0.05)。MODS+针刺组、MODS+黄连素组7d各组织蛋白表达均低于MODS组(P<0.05),14d时与正常对照组无差异(P>O.05)。MODS+针刺+黄连素组72h各组织CD14、TLR4、NF-κBP65蛋白表达均低于MODS组(P<0.05),7d、14d时与正常对照组、假手术组无差异(P>0.05)。MODS+SDV组小肠、肝、肾组织24h、72h时CD14、TLR4、NF-κB P65蛋白表达均高于MODS组(P<0.05),7d、14d时仍高于正常对照组,心、肺组织各蛋白各时间点表达变化与MODS组无差异(P>0.05)。MODS+SDV+针刺组、MODS+SDV+黄连组、MODS+SDV+黄连素+针刺组小肠、肝、肾组织CD14、TLR4、NF-κBP65蛋白表达与MODS+SDV组无差异(P>0.05),心、肺组织CD14、TLR4、NF-κB P65蛋白各时间点表达变化同MODS+针刺组、MODS+黄连素组。MODS+SDV+黄连素+针刺组心肺cdl4、tlr4、nfkbp65各时相蛋白表达与MODS+针刺+黄连素组无显著差异(P>0.05)。5.a7nAchR免疫印记法蛋白表达结果:假手术组与正常对照组相比,a7nAchR在肺、小肠、肝、肾、心脏中的表达变化无显著差异(P>0.05)。MODS组72h各组织a7nAchR水平达到高峰,显著高于正常对照组、假手术组(P<0.05),7d、14d时较正常对照组、假手术组无差异(P>0.05)。MODS+针刺组、MODS+黄连素组24h肺、小肠、肝肾、心脏a7nAchR表达均高于MODS组,低于MODS+针刺+黄连素组(P<0.05),7d、14d时高于正常对照组、假手术组(P<0.05)。MODS+针刺+黄连素组24h各组织a7nAchR表达均高于MODS+针刺组、MODS+黄连素组(P<0.05),7d、14d时均高于正常对照组、假手术组(P<0.05)。MODS+SDV组小肠、肝、肾组织各时相a7nAchR表达均低于MODS组(P<0.05);心、肺组织a7nAchR各时间点表达水平变化与MODS组无差异(P>0.05)。MODS+SDV+针刺组、MODS+SDV+黄连组、MODS+SDV+黄连素+针刺组小肠、肝、肾组织a7nAchR各时间点表达水平变化与MODS+SDV组无差异(P>0.05),心、肺组织a7nAchR各时间点表达变化同MODS+针刺组、MODS+黄连素组(P>0.05)。MODS+SDV+黄连素+针刺组心、肺a7nAchR的表达与MODS+针刺+黄连素组无显著差异(P>0.05)。6.CD14、TLR4、NF-κB P65 rt-PCRmRNA在各组织表达变化与其蛋白表达规律及各组间比较结果相同。7.TNF-α ELISA法表达变化:假手术组与正常对照组相比,TNF-α在肺、小肠、肝、肾、心脏中的表达变化无显著差异(P>0.05)。MODS组24h各组织TNF-α水平达到高峰,显著高于正常对照组、假手术组(P<0.05),14d时与正常对照组、假手术组无差异(P>0.05)。MODS+针刺组、MODS+黄连素组72h肺、小肠、肝肾、心脏TNF-α表达均低于MODS组,高于MODS+针刺+黄连素组(P<0.05),7d时较MODS组明显下降(P<0.05),14d时与正常对照组、假手术组无差异(P>0.05)。MODS+针刺+黄连素组24h各组织TNF-α表达均低于MODS+针刺组、MODS+黄连素组(P<0.05),72h时下降,7d均恢复正常表达(P>0.05)。MODS+SDV组小肠、肝、肾组织24h、72h时TNF-α表达均高于MODS组(P<0.05),7d、14d时仍见有表达;心、肺组织TNF-α各时间点表达水平变化与MODS组无差异(P>0.05)。MODS+SDV+针刺组、MODS+SDV+黄连组、MODS+SDV+黄连素+针刺组小肠、肝、肾组织TNF-α各时间点表达水平变化与MODS+SDV组无差异(P>0.05)。MODS+SDV+针刺组、MODS+SDV+黄连组心、肺组织TNF-α各时间点表达变化同MODS+针刺组、MODS+黄连素组(P>0.05)。MODS+SDV+黄连素+针刺组心、肺TNF-α在各时相点的表达与MODS+针刺+黄连素组无显著差异(P>0.05)。8.Ach ELISA法表达变化:假手术组与正常对照组相比,Ach在肺、小肠、肝、肾、心脏中的表达变化无显著差异(P>0.05)。MODS组72h各组织Ach水平达到高峰,显著高于正常对照组、假手术组(P<0.05),7d、14d时较正常对照组、假手术组无差异(P>0.05)。MODS+针刺组、MODS+黄连素组24h肺、小肠、肝肾、心脏Ach表达均高于MODS组,低于MODS+针刺+黄连素组(P<0.05),7d、14d时高于正常对照组、假手术组(P<0.05)。MODS+针刺+黄连素组24h各组织Ach表达均高于MODS+针刺组、MODS+黄连素组(P<0.05),7d、14d时均高于正常对照组、假手术组(P<0.05)。MODS+SDV组小肠、肝、肾组织各时相Ach表达均低于MODS组(P<0.05);心、肺组织Ach各时间点表达水平变化与MODS组无差异(P>0.05)。MODS+SDV+针刺组、MODS+SDV+黄连组、MODS+SDV+黄连素+针刺组小肠、肝、肾组织Ach各时间点表达水平变化与MODS+SDV组无差异(P>0.05),心、肺组织Ach各时间点表达变化同MODS+针刺组、MODS+黄连素组(P>0.05)。MODS+SDV+黄连素+针刺组心、肺Ach的表达与MODS+针刺+黄连素组无显著差异(P>0.05)。9.各组longa神经功能评分比较:正常对照组和假手术组Longa评分均为0分。MODS组大鼠术后24h出现严重神经功能障碍7d时逐渐恢复至正常。MODS+针刺组、MODS+黄连素组、MODS+针刺+黄连素组大鼠术后24小时也均出现不同程度的偏身肢体功能障碍,经治疗后恢复正常。MODS+SDV组与MODS+SDV+针刺组、MODS+SDV+黄连组、MODS+SDV+黄连素+针刺组各时间点功能障碍变化大体一致,均较MODS组重,治疗后恢复较差。10.SIRS发生率,各组死亡率统计:各组大鼠SIRS发生率100%。各组死亡率统计如下:MODS组11.11%,MODS+针刺组7.69%,MODS+黄连素组4.00%,MODS+针刺+黄连素组 4.00%,MODS+SDV 组 25%,MODS+SDV+针刺组 14.29%,MODS+SDV+黄连组 14.29%,MODS+SDV+黄连素+针刺组14.29%。SDV术前大鼠死亡率低于SDV术后(P<0.05)。11.Pearson 相关分析:MODS 组各时相点内毒素、TNF-α、a7nAchR、Ach、CD14、TLR4、NF-κB P65mRNA 和蛋白表达与血浆 WBC、ALT、AST、Cr、BUN、CR、longa 评分测定值的Pearson相关分析显示:内毒素、TNF-α、CD14、TLR4、NF-κBP65mRNA和蛋白与血浆WBC、ALT、AST、Cr、BUN、CR、longa评分测定值呈正相关,Ach、a7nAchR与WBC、ALT、AST、Cr、BUN、CR、longa评分测定值呈负相关。结论1.CHMODS时VCAP对脑出血大鼠各周围脏器具有保护作用;2.电针后三里、耳甲区及口服黄连素治疗可降低内毒素、乙酰胆碱酯酶及各脏器炎症因子的表达,增加Ach、a7nAChR的表达,进而减轻各周围脏器的炎症损伤,改善CHMODS大鼠预后,而且电针后三里、耳甲区联合黄连素治疗疗效更佳。