【摘 要】
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目的:1、探究S100A8/A9抑制剂是否对苯扎氯铵诱导的小鼠眼表炎症及鳞状上皮化生具有抑制作用;2、研究S100A8/A9抑制剂的抗炎及抗鳞状上皮化生作用是否通过PPARγ信号通路调控。方法:从45只BALB/c雄性小鼠中,随机选取10只小鼠不作任何处理,作为正常组（Control组）;余35只小鼠用0.2%苯扎氯铵溶液点右眼,每日2次,建立小鼠眼表鳞状上皮化生模型。21天后,选取建模成功符合实
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目的:1、探究S100A8/A9抑制剂是否对苯扎氯铵诱导的小鼠眼表炎症及鳞状上皮化生具有抑制作用;2、研究S100A8/A9抑制剂的抗炎及抗鳞状上皮化生作用是否通过PPARγ信号通路调控。方法:从45只BALB/c雄性小鼠中,随机选取10只小鼠不作任何处理,作为正常组（Control组）;余35只小鼠用0.2%苯扎氯铵溶液点右眼,每日2次,建立小鼠眼表鳞状上皮化生模型。21天后,选取建模成功符合实验入组标准的30只小鼠,随机分为三组,分别是模型组（Model组）:不作处理;PBS组:腹腔注射PBS溶液0.2ml,每日一次;抑制剂组（Model+Paq组）:腹腔注射S100A8/A9抑制剂Paquinimod溶液10mg/kg,每日一次。在处理第1、7、14、21天,分别行泪膜破裂时间（BUT）检测、角膜上皮荧光素染色、角膜炎症指数评估。评估后处死小鼠,摘取小鼠完整眼球,HE染色观察上皮细胞层数及形态,PAS染色检测结膜杯状细胞数量,免疫荧光法检测角膜、结膜K10、Ki67的表达。免疫组织化学法检测角膜、结膜TNF-α、IL-6的阳性率,Western blot检测角膜、结膜PPARγ、NF-κB蛋白的表达水平,同时采用RT-PCR法分别检测角膜、结膜组织PPARγ、NF-κB、TNF-α及IL-6 m RNA的相对表达量。比较四组小鼠相关因子表达的差异。结果:1、有30只小鼠建模成功入组进行实验。处理前,与正常组比较,模型组、PBS组、抑制剂组三组小鼠的BUT缩短、角膜上皮荧光素染色和炎症指数评分增加,差异均有统计学意义（P＜0.05）;模型组、PBS组、抑制剂组三组间比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）;在处理后第1、7天,除了第7天PBS组与抑制剂组BUT间的差异具有统计学意义（P＜0.05）,余时间点间三项指标差异均无统计学意义（P＞0.05）;在处理后第14、21天,与模型组、PBS组比较,抑制剂组的BUT延长、角膜上皮荧光素染色及炎症指数评分减少,差异均有统计学意义（P＜0.05）。2、HE染色显示,与正常组比较,予以苯扎氯铵溶液滴眼的模型组小鼠角膜上皮欠光滑,上皮细胞层数明显增加;与模型组、PBS组比较,予以Paquinimod腹腔注射的抑制剂组小鼠角膜上皮相对规整,上皮细胞层数较少,与正常组接近。PAS染色提示正常组结膜杯状细胞排列整齐致密,模型组、PBS组杯状细胞数量明显减少,予以抑制剂处理后的杯状细胞数量相对增多。免疫荧光显示模型组、PBS组小鼠角膜、结膜组织可见大量K10、Ki67表达,而抑制剂组K10、Ki67的表达相对减少。3、免疫组化提示,与正常组比较,予以苯扎氯铵溶液滴眼的模型组TNF-α、IL-6表达明显上调,差异均有统计学意义（P＜0.05）;与模型组、PBS组比较,予以Paquinimod腹腔注射的抑制剂组TNF-α、IL-6的表达明显下调,差异均有统计学意义（P＜0.05）。RT-PCR法检测TNF-α、IL-6 m RNA相对表达量的变化趋势与免疫组化结果相同。Western blot显示,与正常组比较,模型组及PBS组PPARγ表达量明显减少、NF-κB表达量明显增加,差异均有统计学意义（P＜0.05）;抑制剂组较模型组、PBS组PPARγ表达增加、NF-κB表达降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。同样,RT-PCR法检测PPARγ、NF-κB m RNA相对表达量的变化趋势与Western blot法检测结果相同。结论:1、S100A8/A9抑制剂对苯扎氯铵诱导的小鼠眼表炎症及鳞状上皮化生具有抑制作用。2、S100A8/A9抑制剂的抗炎及抗鳞状上皮化生作用可能通过PPARγ信号通路调控。
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