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乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤，发病率和死亡率呈上升趋势。传统的手术切除并没有带来满意的生存率，绝大多数病人仍难免死于肿瘤复发及转移。化疗在肿瘤治疗中的地位已经明确并肯定，但现有的化学治疗的效果往往令人难以满意。乳腺癌本身的生物学过程归根结底是基因变化产生的，其发生、发展与多种癌基因过渡表达，以及肿瘤基因失活密切相关。因此，研究新的具有高度选择性的针对基因靶向的乳腺癌治疗是有效控制乳腺癌的迫切需要。硒（selenium,Se）是机体生理活动所必需的微量元素，早在三十年前就有学者把癌的风险和硒元素联系在一起，但直到最近，CombsGF Jr经过多年的研究，认为硒元素是一种新型的、具有抗癌活性的、重要的微量元素，同时美国的NPC（The nutritional Prevention of Cancer）也通过大规模的临床研究，进一步证实了硒元素的抗癌活性。硒元素的抗癌活性是通过硒与蛋白质相关结合物来实现的。硒结合蛋白1（Seleium Binding Protein1SBP1）是硒结合蛋白质的一种，编码基因位于1q21-22，分子量为56KD，其mRNA序列（Gene bank座位号：NM-003944）是由1721个核苷酸组成编码640个氨基酸，研究表明硒元素的预防及抗癌作用是通过SBP1介导的。硒元素靶向激活SBP1基因的表达来发挥其抗癌作用。有研究表明，硒抑制肿瘤的作用与硒的制剂形式有关，实验表明亚硒酸钠的抑癌作用最强。本研究的目的是通过体外实验和动物裸鼠模型的体内实验探讨SBP1的诱导剂亚硒酸钠（Na2SeO3）与常用的化疗药物5-氟尿嘧啶（5-Florouracil,5-Fu）联合应用治疗乳腺癌的效果，并与单独使用Na2SeO3或5-Fu比较，分析亚硒酸钠与化疗药物临床联合抗肿瘤的可行性和有效性及可能的分子机制。研究方法：1．体外培养乳腺癌MCF-7细胞，随机分为4组：I:对照组（NS）、II:5-Fu组、III:Na2SeO3组和IV:5-Fu+Na2SeO3组，每组4-6个样品。根据相关文献结合我室前期工作证实，5-Fu：10ug/ml; Na2SeO3:8umol/L及两药联合应用48h均能明显抑制乳腺癌MCF-7细胞存活率力，有统计学意义。我们选取其药物剂量作为实验的处理浓度进行实验。采用MTT实验法检测肿瘤细胞的生长情况；通过Hoechst33258染色观察细胞的凋亡形态变化；利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞技术检测细胞凋亡。2.体内构建乳腺癌MCF-7荷瘤裸鼠模型，对接种肿瘤细胞后的裸鼠进行一般生长情况的观察。待肿瘤直径长至0.5cm后，随机分成4组：I:对照组（NS）、II:5-Fu组、III:Na2SeO3组和IV:5-Fu+Na2SeO3组，每组6只，并开始给药治疗，I组：对照组，注射生理盐水(NS)；Ⅱ组：注射5-Fu（15mg/kg）；Ⅲ组：Na2SeO3(6mg/kg)；Ⅳ组：5-Fu（15mg/kg）+Na2SeO3(6mg/kg)联合注射；以上均采用腹腔注射的方法给药，观察裸鼠一般生长情况和体重变化、计算瘤体积绘制肿瘤的生长曲线，待治疗结束后摘取瘤体称瘤重并计算抑瘤率。3.待治疗结束后分别处死各组裸鼠，取组织脏器进行固定常规脱水石蜡包埋切片染色，对肿瘤组织及重要脏器，进行病理形态学HE染色观察；4.取切好保存的瘤组织石蜡切片，按常规脱蜡至水，然后进行免疫组织化学SABC法进行检测相关凋亡因子caspase-3、Bcl-2的表达变化情况。5.利用Western blot技术检测实验各组瘤组织相关凋亡蛋白caspase-3、Bax、Bcl-2的表达含量。研究结果：1.体外实验结果显示，5-Fu和Na2SeO3均能抑制MCF-7细胞的生长，5-Fu与Na2SeO3联合应用比单独应用更为有效，细胞的存活率明显降低，表明5-FU与Na2SeO3联合用药能起到对MCF-7细胞的增殖抑制效果，有协同抑制作用。2.体内实验结果显示，接种MCF-7乳腺癌细胞一周后，裸鼠腋窝区出现皮下瘤结节。裸鼠成瘤达0.5cm后开始给药治疗，观察荷瘤小鼠一般生长情况和体重的变化、计算瘤体积绘制生长曲线，待治疗结束后摘取瘤体称瘤重并计算抑瘤率。各组抑瘤率分别为：Ⅰ组：(0.469±0.072--)； Ⅱ组：(0.204±0.02556.44%)；Ⅲ组：(0.244±0.01348.05%)；Ⅳ组：(0.170±0.02163.74%)；观察所有的裸鼠皮下移植瘤为圆形、椭圆形或不规则的结节状，活动度差。实验结束后，取材进行固定常规脱水石蜡包埋切片，行HE染色形态学观察。结果显示，所有皮下成瘤的组织中，细胞呈异型性改变，细胞大小不等，大部分生长活跃并可见核分裂相，重要脏器尚未出现明显异常形态改变。3.免疫组织化学结果显示，所有呈阳性反应的细胞均呈棕黄色或棕褐色，Caspase-3主要表达在癌细胞的胞核，胞浆呈弱阳性。联合用药组Caspase-3表达的平均光密度值明显强于其余三组，差异有显著性；NS组Caspase-3的表达强度明显弱于其余三组，差异有显著性；但5-Fu与Na2SeO3两组之间没有显著差异。Bcl-2阳性物质主要表达在胞浆和核膜，胞核呈弱阳性表达，联合用药组表达的平均光密度明显弱于其余三组，差异有显著性；NS组Bcl-2的表达强度明显强于于其余三组，差异有显著性；Na2SeO3与5-Fu之间没有显著差异。4. Western blot检测显示，联合用药组Caspase-3和Bax的蛋白表达量高于其余三组，差异有显著性；NS组的表达量明显少于其余三组，差异有显著性；Na2SeO3与5-Fu之间没有显著差异。联合用药组Bcl-2的蛋白表达量低于其余三组，差异有显著性；NS组的表达量明显高于其余三组，差异有显著性；Na2SeO3与5-Fu之间没有显著差异。结论：1. Na2SeO3、5-Fu可在体外杀伤MCF-7细胞，联合给药诱导细胞凋亡，可以产生明显的协同作用。联合给药可以产生较为明显的凋亡细胞形态。2.应用MCF-7细胞可成功建立乳腺癌裸鼠移植瘤动物模型，将为研究人乳腺癌治疗的实验研究提供可参考的研究工具。3. Na2SeO3与5-Fu联合应用起到对乳腺癌细胞的联合抑制作用，这种抑制作用和凋亡调节蛋白相关。是通过增强Caspase-3和Bax的表达，抑制Bcl-2的表达来发挥作用。4.联合用药治疗具有较满意的体内抑瘤作用，表现为肿瘤生长抑制，并可诱导裸鼠肿瘤细胞凋亡。5.亚硒酸钠与氟尿嘧啶联合使用可能有效降低化疗药物的毒副作用。6.亚硒酸钠与氟尿嘧啶联合用药抗乳腺癌的治疗明显比单独用药效果增强。这为硒元素用于抗肿瘤的研究提供了实验依据。