异种VEGF基因重组T7噬菌体疫苗的构建及其抗肿瘤效应的初步研究

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背景与目的:肿瘤的生长、转移与瘤区的血管有密切关系,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是已知作用最强,最专一的促血管生成因子。VEGF由于mRNA剪接的不同,而存在5个亚型:VEGF121、VEGF165、VEGF189、VEGF206、VEGF145。其中VEGF165是刺激内皮细胞增生最强有力的因子。用单克隆抗体封闭VEGF与受体结合,抑制肿瘤血管新生实现肿瘤治疗取得了临床有效的结果。用于治疗肿瘤的抗体,既可以用外源性抗体,亦可以用抗原免疫在体内诱导产生内源性抗体。肿瘤疫苗作为肿瘤的特异性主动免疫治疗,其诱导机体特异性主动免疫应答、增强机体抗瘤能力的作用在动物实验中得到肯定,许多疫苗已进入临床实验研究。噬菌体展示技术具有特异的基因-蛋白耦连机制,以其来制备重组疫苗,兼具DNA疫苗和蛋白疫苗的优势,既可以在基因水平把握某一蛋白的立体构型,又可以对其DNA序列进行各式各样的修饰,并在其展示过程中进行蛋白水平检测,有利于方便、快捷、有效地将基因的序列分析与蛋白的功能研究相结合。T7噬菌体勿须分泌到周质或胞外,且操作简便、容易培养、生长迅速、系统稳定,而且是一种小型噬菌体,抗原直接展示在其外壳上,作为载体是合适的。本实验选取了T7select10-3b噬菌体载体来展示外源肽段:T7Select10-3b的P10B可融合小于1200aa的外源肽段(5~15个拷贝/噬菌体),将人源VEGF165(相对于鼠源VEGF164同源性为89%),克隆到T7噬
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