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本试验以成人正常肝细胞L02为研究对象,建立肝细胞脂肪变性模型,以石榴皮多酚纯化物(PPPs)和其主要成分安石榴苷(PC)以及石榴鞣花酸(PEA)为受试物,采用RT-PCR检测肝细胞内与胆固醇流出相关基因PPARγ mRNA、 ABCA1 mRNA、CYP7A1 mRNA的表达量,从而探讨石榴皮多酚通过PPARγ-ABCA1/CYP7A1细胞信号通路对胆固醇流出的影响及分子机制。此外,利用RNA干扰技术,沉默肝细胞中PPARγ、LXRα基因表达,建立PPARγ和LXRα基因沉默肝细胞株L02-siPPARγ和L02-siLXRα。主要研究成果如下:(1)建立肝细胞L02脂肪变性模型:采用高浓度血清构建脂肪变性细胞模型。通过油红0染色观察各组细胞内脂滴变化,用试剂盒测定细胞中胆固醇含量及细胞外液中AST和ALT含量。造模培养24h后,细胞内积累大量红色脂滴,TC含量显著增加,培养液AST和ALT含量升高,肝细胞脂变模型建立。(2)石榴皮多酚对肝细胞内胆固醇含量的影响:不同浓度的PPPs、PC、PEA均能不同程度地减少脂肪变性肝细胞L02内的TC含量,效果依次为:PEA> PPPs>PC,相同浓度下PEA组降胆固醇效果优于PPPs组和PC组。(3)石榴皮多酚对PPARγ-ABCA1/CYP7A1细胞信号通路的影响:PPPs、PC和PEA能够上调肝细胞中PPARγ、ABCA1、CYP7A1基因表达量,激活PPARY-ABCA1/CYP7A1细胞信号通路,促进胆固醇流出。其中PEA的效果最好,与临床上使用的降脂药物洛伐他汀接近,效果由强到弱依次为:PEA>PPPs>PC。(4)建立PPARγ和LXRα基因沉默的L02-siPPARγ和L02-siLXRα细胞系:针对PPARγ、LXRα基因,设计、合成并筛选出能够有效抑制PPARγ、LXRα基因表达的:miRNA,并构建了带有PPARγ、LXRα miRNA的慢病毒载体,用包装后的慢病毒感染靶细胞L02,成功建立相应基因沉默细胞株LO2-siPPARγ和L02-siLXRα。