【摘 要】
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目的: 观察高葡萄糖刺激下人肾小管上皮细胞(HK-2)中PKCδ和p66Shc的mRNA表达及蛋白磷酸化水平。研究PKCδ对高葡萄糖刺激下HK-2细胞p66Shc磷酸化及线粒体转位的影响。 方
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目的: 观察高葡萄糖刺激下人肾小管上皮细胞(HK-2)中PKCδ和p66Shc的mRNA表达及蛋白磷酸化水平。研究PKCδ对高葡萄糖刺激下HK-2细胞p66Shc磷酸化及线粒体转位的影响。 方法: 1、以HK-2细胞作为体外观察的细胞,采用不同浓度和同一浓度不同时间葡萄糖刺激HK-2细胞,分别用Real Time PCR和Western Blot技术,检测PKCδ和p66shc基因及蛋白磷酸化水平。 2、①用PKCδ抑制剂对HK-2细胞进行干预,用或不用高葡萄糖处理后,采用Western blot和细胞免疫荧光技术分析p66Shc蛋白磷酸化水平;②经上述方法处理细胞后,分别提取细胞浆与线粒体蛋白,用Western blot观察磷酸化p66Shc蛋白线粒体转位情况。 结果: 1、高葡萄糖刺激下PKCδ和p66Shc的mRNA表达及蛋白磷酸化水平较对照组明显增加(P<0.05),且呈剂量和时间依赖。 2、用PKCδ抑制剂Rottlerin处理HK-2细胞后,与对照组相比,高糖刺激下胞浆和线粒体p66Shc磷酸化水平明显抑制(#P<0.01)。 结论 1.高葡萄糖可诱导HK-2细胞PKCδ和p66Shc的转录及磷酸化。 2.PKCδ可促进高葡萄糖诱导的p66Shc磷酸化及其线粒体转位。
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