随着地壳运动和工业化发展,生物圈累积的过量氟化物对生物生长发育甚至人类健康造成不可逆的损伤。家蚕作为一种经济昆虫和模式生物,具有重要的经济和科研价值。目前关于家蚕氟中毒的研究和预防措施众多,但缓解氟化物毒性的天然产物和解毒剂仍在不断探索中。白藜芦醇,一种具有生物学活性的植物抗毒素,其抗氧化应激功能被广泛应用,研究表明白藜芦醇能逆转多种不利因素所造成的氧化应激损伤。因此,本课题试图探索白藜芦醇是否具有缓解氟化物毒性的效应,及其对于氟中毒家蚕的潜在作用靶点,进一步推敲这些靶点间的相互作用并发挥解毒作用的具体机制。本课题构建了NaF暴露组、RSV干预组和RSV+NaF共处理组家蚕模型,通过比较体型、体重、中肠组织损伤和氧化应激水平表型指标并评估;利用RNA-seq和TMT高通量筛选差异基因和差异蛋白,GO、KEGG分析基因功能和代谢通路;通过多组学联合分析,筛选关键性基因BmeFE4;最后通过siRNA介导的家蚕BmeFE4干扰验证,阐述RSV调控NaF诱导毒性作用的分子机制。综合分析得到以下结果:（1）家蚕表型性状观察:与Control组相比,600 mg L-1NaF暴露组家蚕体型偏小、体重减轻、死亡率增加;HE染色发现中肠组织的微绒毛减少、细胞发生裂解和死亡;MDA含量升高、抗氧化酶SOD和CAT活性降低、GSH含量减少。相对于NaF暴露组,RSV+NaF共处理组的家蚕取食量、体重相对增加,中肠组织损伤减轻,抗氧化酶活性也得到逆转。（2）家蚕中肠组织的RNA-seq分析:将Control＿vs＿NaF及NaF＿vs＿RSV＿NaF基因集中的上调基因和下调基因进行Venn分析。结果显示,Control＿vs＿NaF＿up和NaF＿vs＿RSV＿NaF＿down交集共有178个DEGs,KEGG富集显示这些DEGs主要参与氨基糖和核苷糖代谢途径。而Control＿vs＿NaF＿down和NaF＿vs＿RSV＿NaF＿up交集共有439个DEGs,GO富集功能主要为葡萄糖醛酸转移酶活性和丝氨酸水解酶活性,KEGG富集发现这些DEGs主要与蛋白消化和吸收、药物代谢-细胞色素P450、细胞色素P450对外源物质的代谢途径相关。选取16个差异基因进行qRT-PCR验证,其中有14个基因与RNA-seq测序结果趋势一致,2个不一致。（3）家蚕中肠组织的TMT差异定量蛋白质组学分析:经阈值筛选后,NaF＿vs＿DZ和RSV＿NaF＿vs＿NaF蛋白集分别筛选到135个和51个差异表达蛋白。Venn分析显示得到6个差异蛋白,猜测白藜芦醇可能通过调控细胞周期、糖代谢或转录后修饰过程发挥作用。TMT测序结果筛选8个蛋白进行PRM验证,发现PRM与TMT结果趋势大体一致。同时取4个蛋白进行酶活活性测定,四组样本酶活与蛋白组表达趋势大体一致。（4）转录组和蛋白组联合分析:为了进一步获得在转录和蛋白水平上表达一致的基因和蛋白。分别将基因集Control＿vs＿NaF与蛋白集NaF＿vs＿DZ,基因集NaF＿vs＿RSV＿NaF与蛋白集RSV＿NaF＿vs＿NaF进行Venn分析,结果显示这两个关联集分别得到13个、4个表达模式一致的基因和蛋白,综合分析发现关键性基因BmeFE4（BGIBMGA002899）,这可能是白藜芦醇调控的重要靶点。（5）BmeFE4的时空表达:生信分析结果显示BmeFE4全长1750 bp,ORF为1602bp;等电点5.18、分子量59.5 KDa、N端有信号肽,属于α-酯酶。qRT-PCR提示不同发育阶段的BmeFE4表达量在L2最高,然后分别为蛹期、L3、蛾期、L5和L4,约为L1的5.64、1.88、1.86、1.55、1.54和1.33倍。BmeFE4在不同组织中的表达量也有差异,在中肠最高,然后依次为马氏管、脂肪体和头,分别为丝腺的22.10、3.39、2.01和1.34倍。表明BmeFE4在不同龄期和组织均能发挥作用。（6）siRNA介导家蚕BmeFE4的干扰验证:siRNA-3片段成功干扰BmeFE4的表达。BmeFE4沉默后,家蚕生长发育受阻、体重减轻。5龄起蚕注射siRNA-3,发现12、24、48 h均能干扰BmeFE4的表达,且12 h效果最佳。干扰72 h发现羧酸酯酶活性被显著抑制,检测到抗氧化酶Bm SOD、Bm CAT、Bm GSTd1、Bm CYP450、Bm HO-1、Bm GPx表达量减少,Bm Trx1、Bm Msr、Bm CYP6ab5表达量增加,而SOD和CAT活性、GSH含量均被显著抑制。以上实验表明BmeFE4可能在应对家蚕氟中毒时发挥重要作用。